Summary
Samenvatting - Practicum: biotechnologie en biochemie, PCR resultaten (J000496A)
- Course
- Institution
Volledige samenvatting van Practicum PCR resultaten Leerpaden + powerpoints
[Show more]
Seller
Follow
marthevanlerberghe
Content preview
Practicum PCR:Resultaten
Tijdens practicum:
DNA extraheren en amplificeren dmv een PCR reactie
Sporen drager losweken DNA uit celkernen extraheren mbv. Chelex
o Chelex: cellen oiv. osmotische druk openbarsten + DNA komt vrij
Sporen- en referentiestalen
Vrijgekomen DNA: PCR reactie
o Multiplex: 5 verschillende lotie amplificeren
4 STRs merkers (TH01, D21S11, D8S1179 & D18S51) + Amelogeninemerker
Obv. Amelogeninemerker afleiden als het een vrouwelijk of mannelijk staal is
Detectie:
Dmv. Capillaire elektroforese
o Mix van formamide en LIZ (= interne standaard) toevoegen aan de stalen
Voor ze geladen werden op de ce
o Nauwkeurige scheiding en exacte lengtebepaling mogelijk
o Formamide: DNA gedenatureerd houden (enkelstrengig)
o LIZ standaard: interne standaard voor elk staal
Obv. dit staal kan de lengtebepaling uitgevoerd worden
Capillaire elektroforese
Volgorde analyseresultaten
1. STR-profiel van negatieve controle bekijken
a. Moet blanco zijn want geen DNA aan toegevoegd
b. Wel pieken contaminatie
2. STR-profiel van positieve controle bekijken
a. Gekend DNA toegevoegd voor PCR amplificatie
i. We weten exact welke allelen we verwachten voor de verschillende lotie
b. Nagaan of verwachte allelen voorkomen op STR-profiel
i. Correct? PCR is goed doorgegaan
3. Andere stalen vergelijken met elkaar match te vinden tss sporen en referentieprofielen vd.
verdachten
Per staal de interne standaard bekijken
o Oranje aangeduid
o Obv. deze gekende lengtes, worden de lengtes vd. andere allelen bepaalt
o Geen pieken op profiel primer piek zichtbaar?
Enkel weergegeven als er geen duidelijke pieken zichtbaar zijn
Primer piek: helemaal links op profiel want heeft maar een lengte van ±20
basenparen
Piek toont alle ongebonden gelabelde primers: kort dus elueren eerst
Piek aanwezig? Primers toegevoegd aan PCR + PCR product toegevoegd bij
het laden op de capillaire elektroforese (zegt niet dat PCR is doorgegaan)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller marthevanlerberghe. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $7.01. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67474 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now