De samenvatting van moleculaire biologie behandeld technieken die nu worden gebruikt in het onderzoek. Het gaat daarbij in op restrictie en recombinatie, mutaties, eigenetica en arrays die worden gebruikt in het lab.
Moleculaire biologie 1 Samenvatng
Hoofdstuk 4:
Restricteeenerecombinatee
Herkennen dezelfde sequentee Het eerste enzym dat wordt ontdekt noemt men een prototype alles
wat daarna komt een isoschizomeer van het prototype
Neoschizomeren:
restricte- enzym die dezelfde DNA volgorde heef als zijn template, maar bindt aan een
andere kant van de templatee
Voorbeeld: AatII (GACGT↓C) and ZraI (GAC↓GTC)
Isoschizomeren:
Restricte-enzymen die op dezelfde plaatsen knippen maar afomstg zijn uit verschillende
organismen worden isoschizomeren genoemd; knippen ze in dezelfde sequente, maar zijn
de knipeinden verschillend dan worden ze neoschizomeren genoemde
Voorbeeld: HpaII (C↓CGG) and MspI (C↓CGG)
Methylering:
DNA-methylering of DNA-methylate is een epigenetsch proces waarbij een methylgroep
(CH3-groep) aan een histon binnen het DNA-molecuul wordt toegevoegde De structuur van
het DNA veranderde Hierdoor kan het gen aan of uit worden gezete
Methylering kan er ook voor zorgen dat restricte enzymen niet meer kunnen bindene Het is
dan een eigen bescherming tegen je eigen restricte – enzymene
Methylate van plasmide DNA heef negateve invloed op transformate-efcicnte
Restrictekaart: Dit is een map waarin de bindingsplekken van verschillende restricte- enzymen zijn
aangegevene
Stappen oplossen:
1e Optellen van de bandjes per restricte- enzym
2e Het eerste restricte enzym in een plasmide tekenen en de bandjes optellen
3e Het tweede restricte enzym in een nieuw plasmide tekenen
4e Kijken hoe de twee plasmides in elkaar moeten passen om de bandjes te krijgen van het
double restricte- enzyme
—Electroforesee
Gelelektroforese is een scheidingstechniek die moleculen onder invloed van
een elektrisch veld laat bewegen in een gele Negatef geladen moleculen bewegen naar
beneden waar de positeve pool (anode) zich bevindte Hoe groter de moleculen, hoe trager
ze zullen bewegen (migreren); hoe kleiner de moleculen, hoe sneller ze zullen bewegene
Restricte en ligate
Ligase
o Wordt gebruikt voor het repareren van DNAe Ligase zorgt ervoor dat twee
complementaire DNA strengen aan elkaar kunnen worden geplakte De energie wordt
daarbij uit ATP verkregene
Plasmiden
Bevat genen voor antbiotca resistente
Heef een MCS
Je kan een insert herkennen mbv blue white screening
,Blue white screening:
Het afreken van B- gal
o X- gal wordt omgezet in X + Galactosidase
Bij het afreken van X- gal zal een kolonie blauw worden, de kolonie zal dan geen insert
hebben opgenomene
o De X van X- gal zorgt voor de blauwe kleur
Bij het niet afreken van X- gal zal een kolonie wit worden, de kolonie heef dan wel een
insert opgenomene
Niet elk type plasmide kan worden gebruikt voor de blue white screeninge Hij moet het
LacZ gen hebben en niet het LacZ gene (deze zorgt namelijk voor een blauwe kleur)
Libariese
Genomisch DNA
o Al het DNA opslaan
o Als je geïnteresseerd bent in de regulerende sequentes, of sequencen
cDNA (copy DNA)
o Alleen de genen die op dat tjdstp in dat weefsel worden afgeschreven
o Als je geinteresseert bent in coderende sequentes voor bijve de expressie van
recombinante eiwitene
o Maken van cDNA
Verschillende DNA sequentes in 1 soort bacterie stoppen
Op een kolom brengen van de oplossing
mRNA isoleren (poly-A staart+ oligo DT primers)
wassen mRNA losmaken van de kolom
XHol en EcoRI primer sites
mRNA cDNA
Amplifceren en methyleren ds cDNA (wordt in het plasmide
gebracht
o Het methyleren is van belang, omdat de restricte enzymen
anders in het cDNA knippen en dit moet niete
Blund ends overhang
+ restrictesite met EcoRI adapter+ knippen met XHoI
in plasmide plakken
Screenen van een
libary
, je hebt eerste een plaat met de kolonies (phage plaque) hierop wordt een nitrocellulose flter
overeen gelegde
De phage zal aan de flter plakkene Wanneer je het flter er vervolgens afaalt, krijg je een
replica van de plaat
Aan het flter wordt vervolgens een 23P probe gevoegde De probe zal binden aan het DNA
van de plaque
Het flter op een X- ray flm plaatsen
De flm ontwikkelen en vervolgens vergelijken met de master platee
Bloten
Northern Blot
o Hybridisate van RNA
o Detecte met probe
Eastern blot
o Hybridizate van eiwiten
o Detecte met probes die postransitonele modifcate detecteren, bv fosforylering
Soutern blot
o Hybridizate van DNA
o Detecte met probe
Western blot
o Hybridizate van eiwiten
o Dectecte met antlichamen
PCRe
Taq polymerase kan alleen kleine stukken DNA amplifceren, aspecifek dus goedkoop
o Maar er zijn veel meer polymerases met andere eigenschappen
Reacte producten
o DNA template
o Primers
o Tris- HCl
o DNTP’ s
o MgCl2
o (Taq) polymerase
primers ontwerpen
template 5’ 3’
complementaire streng maken 3’ 5’
primers lopen naar binnen 5’ 3’
o kijken waar ze moeten plakken op template of op complementaire streng
voorbeeld:
3’ GCT 5’ Primer 2 R
5’ TCC ------------------ CGA 3’ Template
3’ AGG-----------------CGA 5’ complementair
‘5 TCC 3’ Primer 1 F
primers altjd van de 5’ naar de 3’ noteren
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller LindaNoord. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.81. You're not tied to anything after your purchase.
