100% satisfaction guarantee Immediately available after payment Both online and in PDF No strings attached
logo-home
Previously searched by you
Previously searched by you
logo
Alle stof van moleculaire biotechnologie jaar 2 $6.18
Add to cart
Quickly navigate to
Preview
  2.  
  3. HAS Den Bosch (HAS)
  4.  
  5. Biotechnologie

Lecture notes

Alle stof van moleculaire biotechnologie jaar 2

3 reviews
 23 purchases
  • Module
  • Biotechnologie
  • Institution
  • HAS Den Bosch (HAS)

In dit document staat alle stof die tijdens de hoorcolleges behandeld is, en de bijbehorende Campbell hoofdstukken zijn er ook in samengevat. Het wordt ondersteund door duidelijke afbeeldingen. Het is niet per se samengevat, dus het bevat alle informatie die je nodig hebt om je tentamen te maken :)

Preview 5 out of 29  pages

Document information

  • January 17, 2024
  • 29
  • 2023/2024
  • Lecture notes
  • Hanneke en henco
  • All classes

Subjects

  • pcr
  • biotechnologie
  • aantekeningen
  • campbell
  • biologie
  • dna
  • dna technieken
  • genexpressie
  • regulatie
  • genetische modificatie
  • moleculaire biotechnologie

Written for

  • HAS Den Bosch (HAS)
  • Toegepaste Biologie
  • Biotechnologie
All documents for this subject (11)

3  reviews

review-writer-avatar

By: 540346403H • 1 month ago

review-writer-avatar

By: lauwerijssenlieke05 • 1 month ago

review-writer-avatar

By: sophia_kam • 1 year ago

Seller

avatar-seller
jacolineboer

Reviews received

Content preview

Aantekeningen van alle hoorcolleges
biotechnologie




Toegepaste Biologie
Moleculaire Biotechnologie
Jaar 2, Blok 2
16-01-2024
Jacoline Boer

,Inhoud
1. Basis DNA-technieken .................................................................................................................................... 3
1.1 DNA-technieken ............................................................................................................................................ 4
1.2 Extraheren en synthetiseren ........................................................................................................................ 4
1.3 Knippen door middel van restrictie-enzymen .............................................................................................. 4
1.4 DNA plakken met ligatie en hybridisatie....................................................................................................... 5
1.5 DNA kopiëren: PCR en klonen....................................................................................................................... 5
1.6 DNA zichtbaar maken: elektroforese en kleuring ......................................................................................... 6
1.7 RNA isoleren en verwerken .......................................................................................................................... 6
1.8 Conclusie (gekopieerd uit PowerPoint) ........................................................................................................ 7
2. DNA-merkers en DNA-technieken .................................................................................................................. 8
2.1 Inleiding ........................................................................................................................................................ 8
2.2 Onbekende sequentie ................................................................................................................................... 8
2.2.1 Sanger sequencing ................................................................................................................................. 8
2.2.2 Next generation sequencing.................................................................................................................. 9
2.2.3 Beyond next generation sequencing ................................................................................................... 10
2.3 Bekende sequentie ..................................................................................................................................... 10
2.3.1 PCR-RFLP.............................................................................................................................................. 10
2.3.2 Allel specifieke PCR .............................................................................................................................. 11
PCR met microsatellieten ................................................................................................................................. 11
2.3.3 Microarray ........................................................................................................................................... 12
2.3.4 RNA Sequencing analysis ..................................................................................................................... 12
2.3.5 qPCR .................................................................................................................................................... 13
2.3.6 ddPCR .................................................................................................................................................. 14
3. Regulatie van de genexpressie .......................................................................................................................... 15
3.1 Inleiding ...................................................................................................................................................... 15
3.2 Prokaryote genregulatie ............................................................................................................................. 15
3.2.1 Regularor eiwitten en operons ............................................................................................................ 15
3.2.2 Het Lac-operon .................................................................................................................................... 16
3.2.3 TRP ....................................................................................................................................................... 17
3.3 Eukaryotische genregulatie ................................................................................................................. 18
3.3.1 Eukaryotische chromatine modificaties .............................................................................................. 18
3.3.2 Eukaryotische transcription control .................................................................................................... 19
3.3.3 Post-transscriptionele regulatie .......................................................................................................... 20
4. Regulatie van de genexpressie .......................................................................................................................... 21
4.1 Differentiatie............................................................................................................................................... 21
4.2 Inductie ....................................................................................................................................................... 21
4.3 Determinatie ............................................................................................................................................... 21


2

, 4.5 Het ontstaan van een lichaamsbouwplan .................................................................................................. 21
4.6 Horizontale gen overdracht bij prokaryoten .............................................................................................. 22
4.6.1 Transformatie ...................................................................................................................................... 22
4.6.2 Transductie .......................................................................................................................................... 23
4.6.3 Conjugatie ........................................................................................................................................... 24
5. Genetische modificatie ..................................................................................................................................... 26
5.1 DNA-Cloning en genetische modificatie ..................................................................................................... 26
5.2 CRISPR-Cas9 ................................................................................................................................................ 28




3

, 1. Basis DNA-technieken
1.1 DNA-technieken
Genetische merkers zijn stukjes DNA, RNA of eiwit. Het zegt iets over de aanwezigheid van
een bepaald gen. Een stukje DNA kan bijvoorbeeld kenmerkend zijn voor een bepaald gen,
dus als je deze merker kan aantonen, kun je vaststellen dat het gen aanwezig is. Je kunt de
variatie op 3 niveaus zichtbaar maken:
- DNA: genetische variatie
- (m)RNA: verschillen in de genexpressie
- Eiwit: verschillen in de genexpressie en/of genetische variatie

Alle DNA-technieken zijn gebaseerd op:
- DNA-extractie
- DNA-restrictie (knippen)
- DNA ligatie (plakken)
- DNA-hybridisatie (twee complementaire enkelstrengs moleculen aan elkaar binden
- DNA-replicatie/amplificatie (kopiëren)
- Meten/visualiseren

DNA vrijmaken uit cellen: DNA-extractie
DNA chemisch maken: DNA-synthese


1.2 Extraheren en synthetiseren
DNA extraheren betekent het uit de cel halen. Hierbij moeten celwanden, -membranen en
eiwitten worden afgebroken, terwijl het DNA heel moet blijven. Per cel verschilt het hoe je het
DNA er het makkelijkst uit kan halen. Er zijn drie DNA-bronnen mogelijk in een eukaryote cel:
‘normaal DNA’, mitochondriaal DNA en chloroplast-DNA.

Extraheren:
1. Het openbreken van de cellen: lysis. Dit kan bijvoorbeeld door het weefsel fijn te
malen, en/of door een soort zeep toe te voegen waardoor het celmembraan uit elkaar
valt.
2. Eiwitten verwijderen (dit is niet altijd nodig): eiwitten worden meestal afgebroken
door een protease enzym toe te voegen dat eiwitten afbreekt.
3. DNA uit de oplossing halen: door een ijskoude alcohol toe te voegen, slaat het DNA
uit de oplossing neer. DNA is namelijk minder goed oplosbaar in een alcohol dan in
water. Het neergeslagen DNA kan vervolgens uit de oplossing worden gehaald,
bijvoorbeeld door te centrifugeren of door het met een pipet op te zuigen.


1.3 Knippen door middel van restrictie-enzymen
Het knippen van DNA (restrictie) gaat door restrictie-enzymen. Ze knippen een specifieke
DNA-sequentie van een dubbele helix. Ze knippen dus altijd tussen twee ‘letters’.
Verschillende restrictie-enzymen knippen verschillende sequenties, zodat je kunt kiezen waar
je het DNA geknipt wil hebben.
Restrictie-enzymen hebben natuurlijke functies in de cel, bijvoorbeeld het vernietigen van
virus-DNA of het inbouwen van een opgenomen gen in een bacteriechromosoom. Ze zijn


4

, commercieel verkrijgbaar met meer dan 100 verschillende target sequenties. Ze worden
gebruikt om DNA-moleculen kleiner te maken. Dit kan
- Willekeurig: het maakt niet echt uit welk enzym je gebruikt maar je wilt kleinere
stukjes DNA
- Gericht: je kijkt goed welk enzym je gebruikt en je wilt precies tussen twee letters
knippen
Sommige restrictie-enzymen knippen het DNA recht doormidden (blunt), terwijl andere het
DNA diagonaal knippen en zorgen voor korte enkelstrengs uiteinden (sticky ends).
Voor het gebruik hiervan moet je vaak al een goed inzicht hebben in hoe het DNA er uit ziet,
anders is het lastig om precies te kunnen knippen.


1.4 DNA plakken met ligatie en hybridisatie
Ligatie is het plakken van suikerfosfaat ketens door een ligase-enzym. Dit kan handig zijn bij:
- Het inbouwen van conjugatieve plasmiden (dsDNA) in een bacterieel chromosoom
- Het inbouwen van ssDNA na transformatie voordat hybridisatie plaatsvindt
- Het inbouwen van dsDNA na transductie door een transducing particle (HC4)

DNA-hybridisatie is de vorming van complementaire basenparen door twee enkelstrengs
moleculen met elkaar te verbinden door waterstofbruggen. Bij DNA-replicatie verzorgt DNA-
polymerase de hybridisatie.

Hybridisatie: twee enkelstrengs ketens aan elkaar plakken met waterstofverbindingen. Ligatie:
twee stukken die dubbelstrengs zijn aan elkaar doen door fosfaatverbindingen

Oligonucleotiden:
- Primers: enkelstrengs, 18-25 nucleotiden
- Adapters: dubbelstrengs, 18-25 nucleotiden
- Probes: enkelstrengs, 100-1000 nucleotiden


1.5 DNA kopiëren: PCR en klonen
Zelf DNA kopiëren kan zowel in vitro als in vivo. In vivo kan het door PCR. In vivo door gene
cloning (HC2).

PCR staat voor Polymerase Chain Reaction. Er wordt geamplificeerd: heel veel gekopieerd.
Het is niet geschikt voor bijvoorbeeld hele chromosomen, maar wel voor stukken DNA van
100 tot 1500 nucleotiden. Voor de techniek is het handig om een video te bekijken (zie
opmerkingen bij slide 22 bij de PowerPoint HC1).

Je wilt de target-sequentie vermeerderen. Dit doe je door:
1. Het target DNA heel warm maken waardoor het gaat denatureren
2. Er worden twee primers neergezet (een forward en een reverse primer. Deze
verschillen van elkaar!). Het DNA koelt af en de primers kunnen gaan binden op de
begin- en eindstukken, maar de twee strengen moeten niet weer terug gaan binden,
dus ook weer niet te ver afkoelen.
3. Extensie: het DNA wordt verlengd en er komen nieuwe nucleotiden.
Pas bij de derde herhaling heb je je hele target sequentie en geen overige stukken.


5

The benefits of buying summaries with Stuvia:

Guaranteed quality through customer reviews

Guaranteed quality through customer reviews

Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.

Quick and easy check-out

Quick and easy check-out

You can quickly pay through credit card for the summaries. There is no membership needed.

Focus on what matters

Focus on what matters

Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!

Frequently asked questions

What do I get when I buy this document?

You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.

Satisfaction guarantee: how does it work?

Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.

Who am I buying these notes from?

Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller jacolineboer. Stuvia facilitates payment to the seller.

Will I be stuck with a subscription?

No, you only buy these notes for $6.18. You're not tied to anything after your purchase.

Can Stuvia be trusted?

4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)

65040 documents were sold in the last 30 days

Founded in 2010, the go-to place to buy revision notes and other study material for 15 years now

Start selling

Recently viewed by you

Exam (elaborations) ·

(0)

PHI208 Ethics and Moral Reasoning Week 1 Quiz 1

Exam (elaborations) ·

(0)

NADCA EXAM WITH 100% CORRECT ANSWERS 2024.

Summary ·

(0)

Patient Centered Care Delivery - everything

Exam (elaborations) ·

(0)

ISC3701 Assignment 2 2024 - DUE 14 May 2024

Exam (elaborations) ·

(0)

BLAW 3310 Exam 1 with correct Answers 100%

Summary ·

(0)

samenvatting boek 'De diagnostische cyclus'

Exam (elaborations) ·

(0)

AFOQT Table Reading with correct answers.

Package deal ·

(0)

samenvatting alles van blok 4 huidkanker

Summary ·

(0)

Samenvatting Biologie VWO Thema 5 Planten

$6.18  23x  sold
  • (3)
Add to cart
Added