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ESPECTROFOTÓMETRO - UV
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ARTÍCULO DE ESPECTROFOTOMETRÍA
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UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓNFacultad de Ingeniería Agraria, Industrias alimentarias y Ambiental
ESPECTROSCOPIA UV-VISIBLE VIRTUAL
VIRTUAL UV-VISIBLE SPECTROSCOPY
Autor: ANONIMO
Universidad Nacional José Faustino Sánchez Carrión - Escuela de Ingeniería Ambiental
Elaborado desde el 28 de marzo del 2023
RESUMEN
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración
de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones
electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la
concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede
seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma. En esta práctica se darán a conocer las características generales y
conceptos relacionados con la espectrofotometría con el fin de determinar la longitud de onda
donde la muestra presenta la máxima absorción, y tras realizar las correspondientes rectas de
calibrado se cuantificarán las concentraciones de distintas biomoléculas.
Palabras Claves: Absorbancia, Concentración, Enzimas, Correlación, hemoglobina, glucosa,
método de Bradford, método de Lowry, paranitrofnol, creatinina, glucemia, cuantificación,
espectro, dispersión.
ABSTRAC
UV-visible spectrophotometry is an analytical technique that allows the concentration of a
compound in solution to be determined. It is based on the fact that the molecules absorb
electromagnetic radiation and in turn that the amount of light absorbed depends in a linear way on
the concentration. To make this type of measurement, a spectrophotometer is used, in which the
wavelength of the light that passes through a solution can be selected and the amount of light
absorbed by it can be measured. In this practice, the general characteristics and concepts related to
spectrophotometry will be presented in order to determine the wavelength where the sample has
the maximum absorption, and after making the corresponding calibration lines, the concentrations
of different biomolecules will be quantified.
Keywords: Absorbance, Concentration, Enzymes, Correlation, Hemoglobin, Glucose, Bradford
method, Lowry method, paranitrophnol, creatinine, glycemia, quantification, spectrum, dispersion.
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, UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN
Facultad de Ingeniería Agraria, Industrias alimentarias y Ambiental
- Antecedente Internacional
Antecedentes
- Antecedente Nacional En el año 2020 el Instituto Politécnico
Nacional, publica una tesis con el titulo de
En el año 2019 la Universidad Católica Santa llamada “Implementación de un sistema
María, publica una tesis llamada Multicomponente amigable con el ambiente
“Cuantificación de Hidroximetilfurfural por Espectrofotometría UV-Vis” donde su
(hmf) por cromatografía líquida de alta objetivo fue implementar un sistema
resolución (hplc) y espectrofotometría UV- multicomponente menos contaminante para el
visible en miel” Los parámetros evaluados ambiente en el Laboratorio de Espectroscopía
para la validación fueron: linealidad, Molecular y Atómica de la ESIQIE. El
sensibilidad, precisión y exactitud. Para la sistema permanganato de potasio/dicromato
validación del método por HPLC, se realizó en ácido sulfúrico es utilizado ya que es un
un gráfico de calibración en un rango de 19.97 sistema altamente contaminante por los
mg/L a 99.86 mg/L con soluciones de HMF , reactivos y por el disolvente utilizado. Las
presentando un r2=0.9999 el cual indica un pruebas se llevaron a cabo utilizando los
alto grado de correlación, un coeficiente de indicadores rojos de metilo, azul de metileno,
variación (CV%) de 0.31% para la naranja de xileno, naranja de metilo,
repetitividad del sistema instrumental estando calmagita, verde de bromocresol. Los
este resultado dentro de lo estipulado por la indicadores se prepararon con concentración
USP, la cual indica un CV% no mayor del 2% de M debido con esa concentración es posible
, un CV% de 0.06 a 0.49% para la aplicar la Ley de Lambert-Beer para la
repetitividad del método siendo este valor espectroscopia para lograr también disminuir
aceptable según la AOAC que establece un la concentración de residuos. El intervalo de
CV% no mayor a 5.3% , un porcentaje de longitud de onda de experimentación fue de
recuperación de 90.87% el cual se ubica 380 a 760nm. Los resultados obtenidos se
dentro del rango esperado de 80-110% según concluyeron que los indicadores más
la AOAC y un límite de detección (LD) de adecuados son el azul de metileno y el naranja
0.46 mg/L y un límite de cuantificación (LC) de metilo debido a que ambos presentan
de 0.73 mg/L. . Para validar el método estabilidad a la temperatura y a la luz, los
espectrofotométrico, se realizó un gráfico de colores de éstos son muy diferentes y sus
calibración en un rango de 12.24 mg/L a longitudes de las ondas no se traslapan
195.84 mg/L con soluciones de HMF, (PADILLA, 2020)
presentando un r2= 0.9996 el cual indica un
alto grado de correlación, un CV% de 1.23%
para la repetitividad del sistema instrumental
estando este resultado dentro de lo estipulado
por la USP (SANTA CRUZ, GALDOS, 2019)
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, UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN
Facultad de Ingeniería Agraria, Industrias alimentarias y Ambiental
Introducción acreditado y luego volver a verificar el buen
funcionamiento.
La espectrofotometría es uno de los métodos
de análisis más usados, y se basa en la relación
Metodología
que existe entre la absorción de luz por parte
de un compuesto y su concentración. Cuando Para el desarrollo de este de investigación
se hace incidir luz monocromática (de una hemos realizado una ardua búsqueda
sola longitud de onda) sobre un medio exhaustiva y sistemática de literatura
homogéneo, una parte de la luz incidente es científica, la ruta de búsqueda empleada en la
absorbida por el medio y otra transmitida, selección de los artículos científicos se realizó
como consecuencia de la intensidad del rayo con total especificidad, con el fin de obtener
de luz sea atenuada desde Po a P, siendo Po la la literatura científica más específica
intensidad de la luz incidente y P la intensidad requerida para este trabajo.
del rayo de luz transmitido. Dependiendo del
Además, se hizo uso de laboratorios virtuales
compuesto y el tipo de absorción a medir, la
mediante software Espectrofotómetro Virtual
muestra puede estar en fase líquida, sólida o
UV-VIS que está disponible en
gaseosa.
http://biomodel.uah.es/lab/inicio.htm#abs.
El objetivo consiste que el bioquímico cuente
con los materiales necesarios para la
evaluación del funcionamiento del
espectrofotómetro, y de esta manera, pueda
verificar si los parámetros fotométricos se
encuentran dentro de los rangos de
aceptabilidad establecidos de acuerdo a las
normativas internacionales.
Cada sustancia tiene su propio espectro de Figura 1. Aparato Espectrofotómetro
absorción, es una curva que muestra la
cantidad de energía radiante absorbida, Objetivos
Absorbancia, por la sustancia en cada longitud Objetivo General:
de onda del espectro electromagnética a una
determinada longitud de onda de la energía Adquirir nuevos conocimientos sobre el
radiante, cada sustancia absorbe una cantidad proceso de las técnicas sobre la
de radiación que es distinta a la que absorbe espectrometría, analizar resultados y
otro compuesto. aplicar los métodos que se encuentran en
el programa de Biomodel.
Los estándares de calidad del instrumental
deberán cumplirse y por el contrario si algún Objetivos Específicos:
parámetro estuviera fuera de rango, es
conveniente realizar la reparación del Elaborar una curva estándar o de
instrumento a través de un servicio técnico calibración a partir de un espectro de
absorción.
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