Summary
Samenvatting moleculaire biologie & DNA technologie- MLT2- Hogent
- Course
- Institution
Samenvatting + examenvragen uit de les met oplossing
[Show more]
Seller
Follow
emmahespeels
Content preview
Hoofdstuk 1: isolatie van nucleinezurenEX: Welk type binding is belangrijk bij pcr om deze 2 strengen uit elkaar te halen?
Waterstofbruggen
ALTIJD van 5’(fosfaat)3’ (OH groep)
RNA= reactiever, minder stabiel door 2’ OH groep
Hairpin
EX: TRNA kunnen herkennen
EX: In welke fase chromosoom?
Mitose-metafase
DNA ISOLATIE = isoleren (zuiveren) v DNA uit cellen
Nodig voor enzymatische ‘down stream’ toepasssing & werking verstoord bij onzuiver staal
HOE cellen openbreken voor DNA isolatie?
Lyse(buffer) afh van staaltype/celstructuur (versch voorbehandeling+ versch componenten)
‘pretreatment’ kan noodzakelijk zijn (voorbereidende stappen)
Plant&bacterie CELWAND (dier: celmembraan)
Gram+ dikkere wand dan -
- Chemisch (toevoegen v stof)
Detergent: SDS (sodium dodecyl sulfaat), maakt celmembraan kapot (vorming micel),
fosfolipiden uithalen (detergent&chaotrope stof = denatureren substraat = beter
voor enzym (proteinase k))
Alkalische buffer: NAOH
- Biologisch (enzym)
Proteinase K: breekt EW/nucleasen af, celmembraan + EW gebonden op NZ
Eigenschap: breed sprectrum, knipt na hydrofobe AZ
Nadeel: actief bij bep temp (50-70°C)
PH optimum = 8
Invloed = GROOT
Activiteit verhoogd bij aanwezigheid detergenten (SDS, Tween-20, Triton X 100) &
chaotrope stoffen (GuHCL, Guanidium-hydrochloride, ethanol, SDS, ureum,fenol,
mgcl2, guanidiumisothiocyanaat GuSCN)
Functie: EW denatureren+ nuclease onschadelijk maken (enzyme dat NZ afbreekt)
Chaotrope stoffen/zout: vorm EW valt uit elkaar, verhoogt entropie in bio systeem
door interferatie met zwakke intermoleculaire kracht (WB, vdwaalskracht, hydrofobe
effecten 2 hydrofobe mol. hebben aantrekking (aggregeren) dus moeten daar alle
H20 voor wegduwen, chaotroop inhibeert dit)
Effect op biomol. = zelfde als functie Proteinase K + verbreken watermantel DNA
(chaotroop trekt ook aan H2O en is sterker dus wint) + membraanpermeabiliteit
verhogen door verstoring hydrofoobeffect
, Lysozym: bacterie, hydroliseert peptidoglycaan (=maakt kapot) (bacteriele wand) +
breekt celwand van gram+ (Gr – heeft extra membr). Zit in traanvocht
- Fysisch (temp, druk, straling)
Warmte, osmose
- Mechanisch (beweging)
Vortex, soniceren
- Combinatie v versch methodes
Humane cel: proteinase K + detergent + warmte
Bacterie : NAOH + warmte
EX: Welke lading DNA ?
Negatief – (trekt H20 aan)
HOE zuiveren we DNA? Hoe verwijderen we overige celcomponenten?
Voordeel= sneller, gemakkelijker, beter bewaren, stabieler
Na cellyse, lysaat: DNA(zonder EW)/RNA in waterige opl, afbraakmateriaal v cel
(gedenatureerde EW, suikers), detergent, proteinase K, chaotroop
Versch opties:
- Phenol/chloroform extractie (vroeger)
Nadeel: schadelijke productie, duurt lang, moet heel nauwkeurig, isopropanol
precipatie
Voordeel: zeer zuiver dna, goede opbrengt
Versch fasen: waterig (DNA), interfase (celdebris), organische (proteinen EW, lipiden
VETTEN)
Isopropanol toevoegen, centrifuge, DNA slaat neer, bovenste vloeistof weg
- Boom extractie (nu) (kolomchromatografie)
Adsorptie van DNA op silicagel= silica-, samenstelling buffer: hoge zout conc &
chaotroop agens. zoutbrug+
Verwijderen contaminanten= wassen(ethanol & hoge zoutconc), flow through.
Elutie DNA (eluaat) = buffer: laag zoutconc, Tip: membraan goed drogen (GEEN
ethanol)
- Silica membraan technologie (gemakkelijk) voordeel: snel, minder schadelijk,
zuiver+geconcentreerd DNA, makkelijk te automatiseren.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller emmahespeels. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $8.16. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
52510 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now