Summary
week 2 samenvatting faba204
- Course
- Institution
hoorcollege + fimpjes+ werkcolleges
[Show more]
Seller
Follow
photographycuw
Content preview
Hoorcollege 2 Biologische geneesmiddelenWat voor soort sequentie zet je in het “gen van interesse”?
à DNA, de coderende gensequentie:
alle belangrijke informatie van het
gen zit tussen de start en stopcodon.
Hoe kan je het gen amplificeren?
Moet je weten!:
• mRNA haal je uit
het weefsel waar
het gen tot
expressie komt
• Reverse
transcriptase
zet mRNA om in
cDNA (coding
DNA)
• Kan worden
geamplificeerd met PCR
à Cel produceert duizende genen à worden allemaal omgezet door reverse transcriptase
à De bulk van RNA in de cel is ribosomaal RNA en niet messenger RNA, maar ribosomaal
RNA wordt niet geamplificeerd met deze techniek door gebruik van poly-A staart (waar
primer aan bindt) = oligo-DT primer (moet complementair zijn)
, 1. Primer is een begin (startpunt), waaraan een enzym wordt toegevoegd die verlengt =
Reverse transcriptase
2. Je wilt alleen DNA en geen RNA, dus vervolgens voeg je RNAse toe (enzym dat
alleen RNA kan afbreken)
3. Je houdt een single strand cDNA over
PCR
1. Primer kiezen die alleen bindt aan DNA van gen van interesse (hierna dubbelstrengs
DNA)
2. Amplificatie (alleen gen van interesse) à dubbelstrengs DNA
3. Denaturatie (DNA uit elkaar à primers kunnen binden), primer binding, amplificatie
Enzym PCR: DNA polymerase (DNA naar DNA)
What is needed?
1. DNA template (in this case cDNA)
2. Primers: forward and reverse (Why??)
3. DNA polymerase
4. Deoxyribonucleotides: dATP, dGTP, dTTP, dCTP
, 3 steps per cycle:
1. Denaturation (94°): DNA from double to single strand
2. Annealing (60°): primer binds to the complementary sequence on DNA
3. Elongation (72°): DNA polymerase adds nucleotides starting from the pre-existing 3’
end of a primer. The newly made strand grows in 5’ > 3’ direction
Gen moet in plasmide met resistentiegen.
1. Plamide wordt open geknipt met
restricitie enzymen
2. Fragment heeft overhang niet in
fragment, rechte uiteinden = fragment
knippen met restrictie enzym
3. Fragment in plasmide met DNA ligase
3 types of cleavage:
1. Cleave 3’ off center: 5’ overhang (sticky end)
2. Cleave 5’ off center:
3’ overhang (sticky end) 3. Cleave in the middle:
blunt end
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller photographycuw. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.70. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
52510 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now