Celbiologie WPO examen
WPO 1 – Inleiding + lichtmicroscoop
Lichtmicroscoop
Köhler belichting
1. Lichtschakelaar aanzetten
2. Preparaat in de houder plaatsen & lokaliseren van het weefsel (5x)
3. Scherpstellen beeld
4. Velddiafragma bijna dichtdraaien
5. Condensor en focus samen scherpstellen
6. Centreren van de diafragma-lichtvlek
7. Velddiafragma opendraaien tot veld juist belicht is
8. Contrast regelen met het apertuurdiafragma
9. Bij hogere vergroting – stappen herhalen
Vervaardigen van preparaten
Waarom? Weefsel is weinig doorlatend en heeft weinig contrast
Doel: cellen & weefsel observeerbaar maken voor LM/EM
Methode
1. Fixen van het weefsel
Doel:
Weefsel vastleggen in de in vivo toestand →behoud oorspronkelijke
structuur
Beschermen van weefsel tegen autolyse, anoxie en microbiele
aantasting
Methodes
- Fysiche fixatie (vloeibare stikstof)
- Chemische fixatie (formaldehyde, osmiumtetroxyde, …)
o Immersie = onderdompelen
o Perfusie = van binnenuit
2. Inbedden
In inbedmiddel (bv. Parafine) – weefsel wordt hard
3. Snijden in plakjes
- Door middel van een microtoom of
Vriesmicrotoom: voor vriescoupes waarbij weefsel zelf niet
ontdooit -> snel maken
Nadeel: delen van weefsel gaan kapot en morfologie is slechter
- Manier van snijden hangt af van het weefsel en geeft een ander
beeld
4. Kleuren / contrasteren
- Kleurstoffen
- Antilichamen
Vriescoupes maken →belangrijk in de pathologie
Celbiologie – WPO examen
2
, Paraffine- / eponcoupes maken →belangrijk in de histologie:
Chemische fixatie door immersie of perfusie → dehydratatie weefsel (70-90-100%
alcohol)
→ alcohol = oplosmiddel voor inbedmiddel
→ inbedden in: paraffine of metacrylaat (LMS)/ epon of metacrylaat (EMS)
→ uitharden inbedmiddel: paraffine → T↓; epon → T↑ → coupes snijden
→ coupes depraraffineren en rehydrateren → coupes kleuren →coupes
dehydrateren, klaren en monteren
Preparaten van celsuspensies
- Maken van een uitstrijkje (vb. voor bloedcellen)
- Bloed volledig uitstrijken en onder microscoop bekijken
- Cytospintechniek (vb. witte bloedcellen) => let op morfologie wordt
aangetast
- Vervaardigen van een celpellet (verwerken als weefsel)
➔ Door niet te centrifugeren gaan alle celsuspensies naar beneden zakken
en de celpelletn vormen.
Toepassingen van de microscoop
Histologie
=bestuderen van weefsels
- Normale weefsels en pathologie
- Gebruik van kleuringen
- Bv. Lever
(centraal bloedvat is omringd door membraan en sinusoïde (groeve
gemaakt door hepatocyten) niet)
Celkweek
- Cellen worden gekweekt door experimenten
- Deze cellen zijn kleurloos (met kleurstoffen gaan ze dood) ->
fasecontrastmicroscoop
- Volgt de groei van cellen
Digitale beeldacquisitie
Digitale camera gekoppeld aan PC capteert beelden
Image analyse software laat toe om metingen uit te voeren:
- Telleningen van levende/dode cellen
- Bepaling van de zuiverheid
- Meten van oppervlak
Verschillende configuraties bestaan:
- Live cell imaging
= incubator om preparaattafel (live celkweek volgen)
- 3D imaging
= module in software
- Video microscopie
= Time-lapse module + motorized stage
Gevaar: fout conclusies trekken door andere beelden (fotoshop)
Celbiologie – WPO examen
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller louccaloucca. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $5.90. You're not tied to anything after your purchase.