Dendritische cellen opkweken voor immunohherppie
Doel: het genereren van dendritishe sellen (DCi) uit humaan bloed die Th-1 sel astvate eunnen
induseren en eunnen migreren naar lymfoïde organen. De DCi zijn op deze manier zo geishiet
mogelije voor immunotherapie omdat Th-1 sellen sytotoxiishe T-sellen hulp bieden bij bijvoorbeeld
het beitrijden van tumorsellen.
Mehhode: Monosyten zuiveren, vervolgeni diferentate tot
imDCi. Zei verishillende maturatemixen werden gebruiet op
deze imDCi, waarna een IL-6 en IL-12 ELISA voor
sytoeineproduste-metng en een migrate-isoring werden
uitgevoerd.
1. Monocyhen isoleren uih bufycoph
Ssheiden d.m.v. opbrengen op fsoll, sentrifugeren, ringfraste
afnemen, waiien, sentrifugeren, afgieten ets. en daarna te
isheiden met een magneet (MACS).
- Bufycoph: bevat 20% monosyten, dit breng je op fsoll op om het
te isheiden. De dishtheid van Fisoll zit presiei tuiien PBMCi en
erytrosyten met granulosyten in.
- TNC: antitollingimiddel zodat plaima geen ierum wordt,
itollingifastoren blijven intast
- Cellen hellen: 25 hoejei ii 0,1misroliter. 1:2 verdunnen met
trypaanblauw
- MACS-bufer: Bevat EDTA, verlaagt seladheiie waardoor de sellen
dui niet plaeeen aan je materiaal.
- CD14 microbepds (MACS): deze worden geeoppeld aan CD14 op
de monosyten en worden geisheiden in een MACS (Magnets sell
ieparator), een eolom met magneet eraan. De misrobeadi blijven
hangen door de magneet. Door de magneet weg te halen en
daarna met Cellgro-medium en de zuiger door te duwen eonden de
monosyten gezuiverd worden.
2. Monocyhen nppr imDCs
IL-4 en GM-CSF (itmuli) toevoegen aan seliuipeniiei in medium.
Insubate van 6 dagen bij 37 graden. Diferentate wai te zien aan
de groote van de sellen.
3. imDCs nppr mDCs
DCi matureren met PAMPi en sytoeinei. Dit verhoogt sytoeine en
so-itmulatoir molesuul expreiiie, maar ean ooe de
migratesapasiteit verhogen. Mature DCi erijgen uitloperi
waarmee ze eunnen migreren.
- Mphurptiemixen: FCS (foetaal ealfierum), PAMPi (MPLA, LPS) en
sytoeinei (IFN-gamma, TNF-alpha, IL-1-Beta, PGE 2).
- Gouden shpndpprd: TNF-alpha, IL-1-Beta en PGE2
1
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller suzanneharlaar. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.22. You're not tied to anything after your purchase.