Table of Contents
Les 1 – Intro...........................................................................................................................................3
Soorten biotechnologie.....................................................................................................................3
Inleiding expressiesystemen..............................................................................................................3
Post-translationele modificatie (PTM)................................................................................................4
Expressiecassette...............................................................................................................................4
Overwegingen bij de keuze van een expressiesysteem......................................................................5
Les 2 – Isolatie en mutatie van GOI........................................................................................................6
cDNA..................................................................................................................................................6
Genomische bank..............................................................................................................................6
PCR....................................................................................................................................................6
Les 3 - Expressie door bacteriën............................................................................................................8
E. coli als expressiesysteem...............................................................................................................8
Induceerbare expressie in E. Coli.......................................................................................................9
Problemen van het gebruik van E. Coli als expressie systeem..........................................................10
Les 4 – Expressie door schimmels........................................................................................................12
Gisten als expressiesysteem.............................................................................................................12
Les 5 – Expressie door baculovirus......................................................................................................14
Natuurlijke cyclus van het baculovirus.............................................................................................14
Gebruik van het baculovirus als expressievector.............................................................................14
Les 6 - Expressie in animale cellen.......................................................................................................15
Plasmiden als expressie vector in animale cellen.............................................................................15
Induceerbare expressie in animale cellen........................................................................................17
Retrovirussen...................................................................................................................................19
Les 7 - Expressie door transgene planten.............................................................................................20
mRNA antisense technologie...........................................................................................................21
Selectiemarkers uitzetten met het Cre-LoxP systeem......................................................................22
Procedure van het maken van een transgene plant.........................................................................22
Les 8 – Genetisch gemodificeerde dieren............................................................................................23
Dieren als expressiesysteem............................................................................................................23
Knock-in dieren maken....................................................................................................................24
Knock-down dieren maken..............................................................................................................25
Knock-out dieren maken..................................................................................................................26
Les 9 – Gentherapie.............................................................................................................................28
Virale DNA delivery..........................................................................................................................28
1
, Biotechnologie | Chiara ten Seldam
Niet-virale DNA-delivery..................................................................................................................31
Les 10 - Proceskunde voor de biotechnologie......................................................................................31
Productieproces...............................................................................................................................32
Type bioreactoren............................................................................................................................33
Les 11 – Ethiek en de maatschappelijke perceptie van biotechnologie...............................................34
2
, Biotechnologie | Chiara ten Seldam
Les 1 – Intro
Biotechnologie = toegepaste moleculaire biologie
Soorten biotechnologie
Rood = farmacie
o Therapeutische recombinante eiwitten (insuline/interferonen)
o Verschillende catergorien recombinante eiwitten
Virale kapseleiwitten (vaccins)
Enzymen (voor stofwisselingsziekten)
Antilichamen
Stollingsfactoren (voor hemofilie
Hormonen en groeifactoren (insuline, EPO, groeihormoon)
Immuunregulatie (interleukines, interferonen)
Groen = landbouw
o Resistentie tegen schimmels en/of infectie
o Minder gevoelig voor milieu (droogte, lage/hoge temperaturen)
o Hogere opbrengst/ betere kwaliteit
o Aanpassingen in de planten (glutenvrij graan, rijst met extra vitaminen, katoen dat beter
blauwe vloeistof opneemt.
o Biobrandstof
Wit = industrie en huishouden
o Waspoeder en andere schoonmaakmiddelen, toevoegen van proteases/lipases zodat de
was bij een lagere temperatuur kan worden gewassen.
o Biologische grondstoffen voor afbreekbare plastics
o Biologische afbraak van vezels (papier/textielindustrie)
Blauw/Bruin/Grijs = milieuopruiming
o Biologisch opschonen van industrieel afval
o Opruimen olie/gif lekkage met behulp van bacterien
o Waterzuivering met behulp van micro-organismen zoals algen
Inleiding expressiesystemen
GOI (gene of interest) wordt verkregen door middel van
PCR.
Het is handiger om mRNA te gebruiken als
uitgangspunt in een expressiesysteem, want dan worde
de stap van het wegknippen van de intronen omzeild.
De meeste expressiesystemen kunnen deze stap niet
doen, omdat die geen intronen hebben. Bij mRNA zij de
intronen er al uitgeknipt en heb je het coderende deel
van het gen (de exonen oftewel het CDS)
Voor weefselspecifieke eiwitten moet er mRNA worden
geïsoleerd uit de cellen waar het eiwit wordt
geproduceerd.
De verkregen mRNA wordt met behulp van reverse
transcriptases omgezet in cDNA.
Met een PCR wordt het gen dan vermeerderd.
Transformatie in expressiesysteem voor de productie van het eiwit dat komt uit het GOI
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller chiaratenseldam. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $9.11. You're not tied to anything after your purchase.