Summary
samenvatting- WPO
- Course
- Institution
Deze samenvatting omvat alles over de slides en handleiding van de WPO van celbiologie
[Show more]
Seller
Follow
cameroncroese
Content preview
WPO 2I. inleiding
histologie bestudeert samenstelling weefsels: nadruk v celtypen in weefsel = m.b.v. microscoop bekeken
celtypen = verschillen door vorm + zichtbare eigenschappen + functies
wnr cellen groeperen = weefsel
weefsel = geordende groep cellen met gelijkaardige eigenschappen verkregen door celdifferentiatie
II. correct gebruik van lichtmicroscoop
beste = om “Köhler-belichting” toe te passen
1. lichtschakelaar aanzetten (lichtsterkte)
2. preparaat in houder plaatsen (onder object)
3. lokaliseren weefsel (kleinste vergroting)
4. scherpstellen
5. velddiafragma bijna dichtdraaien
6. condensor + focus scherpstellen (beeld oculair scherp)
7. diafragmalichtvlek centreren
8. velddiafragma opendraaien tot hele veld juist belicht
9. apertuurdiafragma regelen (contrast)
10. overgaan naar hogere vergroting: herhaal stap 4-9
immersie-objectief (100x) enkel gebruiken na druppeltje immersie-olie op preparaat
II.1 het maken van tekeningen
• celgrenzen
• grootteverhoudingen ltl v celtypen
• verhouding kern/cytoplasma
• teken groepje cellen in weefselverband
• getekende vergroting
• 1cel = 2cm
III. vervaardigen van preparaten
III.1 het vervaardigen van weefselcoupes
wrm preparaten ? biologisch materiaal = weinig lichtdoorlatend + geeft weinig contrast
doel ? cellen + weefsel observeerbaar maken voor LM/EM
methode ?
1) fixeren van weefsel: zodat geen morfologische wijzigingen
doel? weefsel vastleggen in vivo toestand (=oorspronkelijke structuur) zonder artefacten optreden +
beschermen weefsel tegen autolyse, anoxie en microbiële aantasting (=3 oorzaken artefacten)
! wnr weefsel bewerkt kunnen artificiële structuren optreden ≠ overeenkomen reële situatie levende cellen!
• via chemische stoffen (=fixatieven): tijdens fixatie treedt denaturatie of ‘cross-linking’ op van
eiwitten in weefsel => werking eiwitten stilgelegd + werking enzymen (=verantwoordelijk uiteenvallen
cellen en weefsels bij isolatie uit lichaam/ na dood =>3 chemicaliën: formaldehyde + glutaaraldehyde +
osmiumtetroxyde MAAR voor paraffinepreparaten = Bouin’s fixatief: mengsel picrinezuur + formaldehyde
—>immersiefixatie: fixatie van buiten uit waarbij weefsel na isolatie uit lichaam in fixatief
ondergedompeld
—>perfusiefixatie: fixatie van binnen uit = enkel mogelijk bij proefdieren => lichaam dier
geperfuseerd + bloed EERST vervangen door NaCl DAN door fixatief (=paraformaldehyde)
• via fysische methode: weefsel gefixeerd door vriezen vloeibare stikstof: snelle diagnose pathologie nodig
, 2) inbedden: weefsel ingebed in materie hard genoeg om coupes maken => paraffine OF plastics
methacrylaat EN epon(= vooral bij EM) => HOE harder inbedmedium, HOE dunner coupes
EERST water uit weefsel verwijderen => coupes onderdompelen baden met stijgende alcoholconcentratie
= dehydratatie
DAN alcohol vervangen door oplosmiddel waarin inbedmiddel oplosbaar is => penetratie inbedmiddel
volgende fase vereenvoudigen
LAATSTE weefsel in vloeibaar inbedmiddel gelegd (vb; warme paraffine) waarna laat hard worden
! inbedmiddel MOET weefsel volledig binnendringen om goede coupes te maken ANDERS slecht zichtbaar !
3) snijden: preparaat voldoende dun om licht door te laten => coupes snijden van weefsel OF orgaan
coupes LM = 3-12 um MAAR coupes TEM = 50-100 nm
v soorten coupes: vries-, paraffine- of epon-coupes
=> dwars of overlangs snijden
• vriespreparaten: + snel proces - morfologie gaat snel kapot
1)weefsel snel vriezen in vloeibare stikstof
2)coupes gesneden m.b.v. vriesmicrotoom
3)coupes gedroogd
4)opnieuw gefixeerd (immersie organische solventer)
5)coupes kleuren (kleurstoffen/ antilichamen)
• paraffine-/ eponcoupes: + behouden langer - trager proces
als coupes ≠ rehydrateert: kleuring ≠ diep genoeg
III.2 het verwerken van celsuspensies
suspensies van losse cellen = op microscoopglaasjes gebracht d.m.v. v technieken
• uitstrijkje = gemaakt door druppeltje suspensie met voorwerpglas over 2de glaasje uitstrijken zodat
dunne film vormt + film aan lucht gedroogd + gefixeerd
• cytospinpreparaat = gemaakt door in speciaal uitgeruste tafelcentrifuge cellen te sedimenteren op
voorwerpglaasje
• celpellet = centrifugeren van celsuspensie tot vast propje cellen
IV. toepassingen van de (licht)microscoop
IV.1 histologie
= weefsels bestudeerd: zowel normale weefsels als pathologische weefsels
weefsels = kleurloos =>v kleuringen toegepast om weefsels + cellen te contrasteren
1) geïsoleerde leverparenchymcellen, rat, toluidineblauw (epon)
behandeling met enzymen (collagenase) => lever herleid tot suspensie losse cellen
bloedvat = omringd door membranen MAAR sinusoïd niet, WEL gemaakt door omringende hepatocyten
bij grote vergroting onderscheiden we ronde kern met 1/2 nucleoli + cytoplasma met donkergekleurde
“eilandjes” van organellen
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller cameroncroese. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $17.38. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67096 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now