Alle uitgewerkte meetrapporten voor de toetsing van MBE, compleet met doelen, verwachtingen, resultaten en conclusie. Het document is erg overzichtelijk en bevat handige foto's en makkelijk te begrijpen tekst, waardoor je het snel begrijpt.
Ik heb met dit document een 9.2 gehaald.
Het doel van kloneren is om een plasmide in een bacterie te brengen. Door te transformeren, kunnen
de bacteriën vaak het bewerkte plasmide repliceren. Dit DNA kun je later isoleren en gebruiken voor
bijvoorbeeld transfectie in eukaryote cellen. Het doel van kloneren in dit experiment is om
competente E. coli DH5α cellen het plasmide op te laten nemen door middel van een heat shock.
Door deze stap te doen, kunnen de bacteriën vaak het bewerkte plasmide repliceren. Door later in
het kloneringsproces het plasmide uit de bacteriën te isoleren, heb je veel kopieën van het plasmide
die je kunt gebruiken voor de transfectie in Dictyostelium discoideum.
Verwachting Transformatie
Tabel 1: Verwachtingen van de transformatie van competente E. coli DH5a
Plaa Wat is er uitgeplaat? Voedingsbode Verwachting (kolonies/aantal)
t (benoem alle componenten per m
plaat)
1 Competente E. coli DH5α LB-agar + Groei, redelijke hoeveelheid
getransformeerd met ampicilline kolonies
pDM317+H2B
2 Competente E. coli DH5α LB-agar + Geen groei
getransformeerd met geknipt ampicilline
pDM317
3 Competente E. coli DH5α LB-agar + Groei, redelijke hoeveelheid
getransformeerd met pDM317 ampicilline kolonies
(Positieve controle, laat zien dat
bacterie plasmide op kan nemen)
4 Competente E. coli DH5α LB-agar + Geen groei
ampicilline (Controle, laat zien dat bacterie
niet van te voren al ampicilline-
resistent was)
5 Competente E. coli DH5α LB-agar zonder Groei, hele plaat vol
ampicilline (Controle, laat zien dat de cellen
niet van te voren al dood zijn)
Je verwacht groei op plaat 1, mits de bacterie het plasmide met het insert heeft opgenomen. Dit
komt doordat het plasmide een ampicillineresistentie gen bevat. Hierdoor gaan alle bacteriën die het
plasmide niet op hebben genomen dood (door de ampicilline) en overleven alleen de bacteriën die
het plasmide hebben opgenomen. Op plaat 2 verwacht je geen groei, omdat het geknipte plasmide
een lineair stuk DNA is. Doordat het geknipte plasmide behandeld is met CIP, kan het niet zichzelf
ligeren. Bacteriën kunnen dit stuk DNA niet gebruiken. Op plaat 3 verwacht je groei. Het plasmide dat
gebruikt is voor deze transformatie bevat niet het insert, maar omdat het plasmide alsnog het
ampicillineresistentie gen bevat zullen de bacteriën alsnog groeien op de plaat (mits de bacterie het
plasmide heeft opgenomen). Deze plaat geldt als controle, om te controleren of de bacteriën een
plasmide op kunnen nemen. Op plaat 4 verwacht je geen groei. Dit komt doordat de cellen geen gen
voor ampicillineresistentie hebben. Deze plaat geldt als controle. Als je groei vindt op deze plaat, kan
het betekenen dat de bacteriën al van tevoren ampicillineresistent waren. Op plaat 5 verwacht je
veel groei. Deze bacteriën worden uitgeplaat op een plaat zonder ampicilline en zullen dus ook
zonder opgenomen plasmide moeten kunnen groeien. Ook deze plaat geldt als controle, als je op
deze plaat geen groei vindt kan het betekenen dat de competente cellen vóór het uitplaten al dood
waren.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller bodhivanwieringen. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $10.84. You're not tied to anything after your purchase.
