Summary
Samenvatting Moleculaire biologie technieken
- Course
- Institution
samenvatting voor het vak moleculaire biologie het technieken onderdeel. Korte sammenvatting maar hij heeft mij geholpen het tentamen te halen!
[Show more]
Seller
Followesrahelfrich
Reviews received
Content preview
Isolatie nucleïnezurenisolatie DNA
Step 1: Cell Lysis
• Openbreken celwand, plasmamembraan & kernmembraan
• Denaturatie & degradatie eiwitten (e.g. nucleases)
Step 2: DNA binding
• Blootleggen (-) lading DNA backbone
• Vormen van zoutbruggen tussen DNA (-) en silica (-)
Step 3: Washing
• Wassen van kolom om eiwitresten en zouten te verwijderen
Step 4: Elution
• Verbreken van zoutbruggen tussen DNA en silica
• Opvangen gDNA
Isolatie van RNA zelfde manier als bij DNA, maar:
- DNA contaminatie is zeer waarschijnlijk
- RNA is zeer instabiel TRIZOL stabiliseert RNA na isolatie meteen snap freeze van
samples in vloeibare stikstof
- RNase zeer stabiel DEPC toevoegen om te inactiveren
Endonuclease = knipt in het midden
Exonuclease = knipt aan het uiteinde
Nucleases knippen tussen deoxribose en fosfaatgroep (de fosfo-diester
verbindingen)
Restrictie enzymen maken viraal DNA onschadelijk knippen eigen DNA niet omdat deze
gemethyleerd is.
Isoschizomeren:
Verschillende enzymen met dezelfde herkenningssequentie en zelfde manier van knippen
Neo-isoschizomeren:
Verschillende enzymen met dezelfde herkenningssequentie maar verschillende manier van knippen
, Ligases
Sticky-end dna streng waar een complementair deel aan kan plakken
Blunt-end niet sticky-end de nuclease knipt in een rechte lijn en blijft niet over om nog iets aan te
plakken
Er is een palindroom nodig om te kunnen knippen
Gelelektroforese:
Scheiding op basis van grootte van DNA moleculen, kleine fragmenten lopen het snelst.
Lading van DNA negatief
SYBRsafe zorgt ervoor dat het DNA zichtbaar wordt in de gel. Doordat het tussen basen hecht het
DNA is te zien als bandjes op de gel.
Agarose gel concentratie agarose bepaald dichtheid.
Laag % voor scheiding grote fragmenten.
Hoog % voor scheiding kleine fragmenten.
Polyacrylamide gelelektroforese (PAGE)
Veel hogere dichtheid dan agarose scheiding tot op 1 nucleotide
nauwkeuring!
Ontwikkeld voor eiwitscheiding
Verticaal
Pulse-field elektroforese voor zeer grote fragmenten
Afwisselende richting van elektrisch veld, DNA fragmenten moeten zich steeds opnieuw richten
(remt af) fragmenten tot 2 mb gescheiden
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller esrahelfrich. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.44. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
73091 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now