Exam (elaborations)
EXAMENVRAGEN + OPLOSSINGEN GIP
- Course
- Institution
Geen tijd om te leren voor dit vak? Geen probleem, leer deze vragen en je bent gegarandeerd erdoor!
[Show more]
Seller
Follow
Sciencestudent123
Content preview
Examenvragen + oplossing GIPBespreek de belangrijkste kenmerken van het pUC19 plasmide (tekening plasmide gegeven) + hoe
weten we dat de transformatie van competente E.coli cellen met dit plasmide gelukt is? + wat verstaan
we onder blauw/wit selectie bij klonering in het plasmide? (5 punten)
(handleiding p30)
pUC19:
Belangrijkste elementen:
1. ORI: startsite replicate plasmide
2. AmpR: beta-lactamase breekt beta-lactamring van Amp (agar) af -> geen functioneel Amp
3. LacZalfa: N-terminus van LacZ gen = reportergen
Tranformatie LacZalfa gen in bacterie met lacZbeta deel -> volledig LacZ gen -> functioneel
beta-galactosidase. IPTG induceert de lac promotor voor aanmaak beta-galactosidase, leaky
expression kan plaatsvinden.
X-gal wordt afgebroken door beta-gelactosidase -> blauw precipitaat
Transformatie gelukt? Bacterie groeit op agar met Amp, witte kolonies op agar zonder X-gal, blauwe
kolonies op agar met X-gal
Blauw/wit selectie: MCS met aantal restrictie sites aan het begin van LacZ gen. Insertie van een ander
gen in LacZ mbv. restrictie digestie -> niet-functioneel beta-galactosidase -> X-gal wordt niet
afgebroken -> witte kolonies waar transformatie heeft plaatsgevonden (enkel bij pUC19)
,bespreek de belangrijkste kenmerken van het pGLO plasmide (tekening van plasmide wordt gegeven
+ ook afbeelding van de werking van het ara operon) + Hoe weten we dat de transformatie van
competente E. coli cellen met dit plasmide gelukt is? + bespreek de rol van het ara operon in de
expressie van GFPuv
(handleiding p31)
pGLO:
Belangrijkste elementen:
1. ORI: = origin of replication
2. AmpR-gen: codeert voor B-lactamase. Dit breekt de B-lactamring van ampicilline af, waardoor
ampicilline zijn werking verliest.
3. GFPuv-gen: fluorescerend groen onder UV-licht = reportergen, wordt afgeschreven na PBAD
promotor
4. PBAD: induceerbare promotor voor het GPVuv gen
5. araC: codeert voor AraC proteïne = repressor PBAD, RNAP zal niet kunnen binden op PBAD
Arabinose bindt AraC -> conformatieverandering AraC -> bindingsplaats voor RNAP op DNA
komt vrij -> GFPuv wordt afgeschreven
Transformatie gelukt? Bacterie groeit op agar met Amp, witte kolonies op agar zonder arabinose,
groene kolonies onder UV-licht op agar met arabinose.
, oefening zuiverheid DNA: absorbantie bij 260 en 280 nm gegeven en DNA/RNA bepalen en
concentratie nucleïnezuren (er zijn geen proteïnen in het mengsel aanwezig)
(handleiding p40-41)
a260/a280
~1,8 -> zuiver DNA
~2 -> zuiver RNA
Als verhouding lager is -> aanwezigheid van contaminanten die sterk absorberen bij 280 nm
Als er geen proteine zijn kunt ge dees ni gebruiken
%P + %N = 100
Voor 1 mg/ml DNA: a260,n=20 en a280,n=10
Voor 1 mg/ml eiwitten: a260,p=0,57 en a280,p=1
-> 2 vergelijkingen en 2 onbekenden
(%= 1g/100ml)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller Sciencestudent123. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.30. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
80461 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now