Summary
Samenvatting Biotechnologie
- Course
- Institution
Het bevat een samenvatting van het biotechnologie deel van het vak biotechnologie en gezondheid. Het wordt gegeven in het eerste leerjaar van de opleiding BMO.
[Show more]
1 review
By: nickstormer1 • 5 year ago
Seller
Follow
Niempje21
Reviews received
Content preview
BiotechnologieMethodes voor manipulatie van DNA
Genetische manipulatie (engineering) is het gebruik van in vitro technieken om genetische materiaal
in het laboratorium te veranderen. De genen die veranderd zijn kunnen teruggeplaatst worden in
origin van de host organisme. DNA moet in specifieke fragmenten geïsoleerd worden en opgezuiverd
worden voor verdere manipulatie.
Basistechnieken:
Restrictie enzymen
Gelelektroforese
Nucleïnezuurhybridisatie
Nucleïnezuursondes
Moleculair klonen
Klonen van vectoren
Restriction Enzymes and Nucleic Acid Separation
Restrictie enzymen herkennen specifieke DNA sequenties en knippen het DNA op deze plaatsen die
herkend worden. Bij het knippen worden de phosphodiester back bones geknipt. Het is essentieel
voor de in vitro DNA manipulatie, zeldzaam in eukaryoten, bescherm prokaryoten tegen vijandig
vreemd DNA (virale genomen).
Er zijn 3 verschillende klassen restrictie-enzymen:
Type I; binden aan DNA bij de herkenninssequenties maar knippen het DNA op een bepaalde
afstand.
Type II; splitsen DNA in herkenningssequentie en zijn het meest bruikbaar voor specifieke
DNA manipulatie.
Type III; binden aan DNA bij de herkenninssequenties maar knippen het DNA op een
bepaalde afstand.
Restrictie enzymen herkennen palindromen (omgekeerde herhalingssequenties). Het is
meestal 4-8 basenparen lang; EcoRI herkent een reeks van de 6 basenparen.
Restrictie enzymen beschermen de cel tegen invasie door vreemd DNA. Het vernietigd
vreemd DNA. Het moet het eigen DNA beschermen tegen onbedoelde vernietiging.
Sticky ends of blunt ends. De sticky ends worden gemaakt door EcoRI. Bij de sticky ends is als
er twee stukken uit elkaar gehaald worden en er twee verschillende dingen zijn. Het EcoRV
knipt beide strengen van het DNA direct tegenover elkaar, hier heb je niet zoveel aan (blunt
ends).
, Modificatie enzymen: beschermen het DNA van cellen voor restrictie enzymen. De modificatie
bestaat in het algemeen uit methylatie van DNA. Chemisch modificeren van nucleotiden in
restrictieherkenningssequentie. Het kan gemodificeerd worden met methylases, methylgroepen zijn
toegevoegd, bescherming restrictiesite van knippen door EcoRI en EcoRV.
Gelelektroforese: scheidt DNA moleculen op basis van grootte. Bij de elektroforese wordt gebruik
gemaakt van een elektrisch veld om geladen moleculen te scheiden. De gel is gemaakt van agarose,
een polysacharide. De nucleïnezuren migreren door gel naar de positieve elektrode vanwege de
negatief geladen fosfaatgroepen. De gel wordt gekleurd met ethidiumbromide en DNA kan worden
gevisualiseerd onder het UV licht. De kleine fragmenten lopen sneller door de gel dan de grote
fragmenten. Er is een spanningsverschil op het vel, de negatief gelanden DNA moleculen bewegen
naar de positieve pool toe.
The Polymerase Chain Reaction
DNA replicatie in vitro; amplificatie PCR die de segmenten DNA kopieert.
1. Template DNA wordt gedenatureerd door de hitte.
2. Artificial DNA oligonucleitde primers worden op elke streng toegevoegd.
3. DNA polymerase extentie van primers gebruikmaken van originele DNA als template.
4. Incubatie tijd; temperatuur omhoog, streng gescheiden, target gen 2x zoveel aanwezig.
5. Temperatuur omlaag, primers hybridiseren met complementaire regio’s van nieuw gemaakt
DNA.
Toepassingen van PCR:
Phylogenetic studies
Het onderzoeken van verschillende groepen omgevingsorganismen (surveying different
groups of environmental organisms)
Versterking van kleine hoeveelheden DNA (amplifying small amounts of DNA)
Identificatie van een specifieke bacterie (identifying a specific bacteria)
Op zoek naar een specifiek gen (looking for a specific gene)
Variaties van PCR:
Reverse transcriptie PCR (RT-PCR); kan DNA van een RNA sjabloon maken, gebruikt het
enzym reverse transcriptase
Kwantitatieve PCR (q-PCR); gebruikt een fluorescerende sonde om het versterkingsproces te
volgen
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller Niempje21. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.79. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
80796 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now