Summary
Samenvatting Cel II Cytologie Microscopie
- Course
- Institution
Een zeer gedetailleerde en gestructureerde samenvatting van het gedeelte over de microscopie in cel II cytologie, gegeven door prof J. Van Hengel
[Show more]
Seller
Follow
StudentjeGeneeskunde1
Content preview
Samenvatting cytologiecel II (LM)
1. Lichtmicroscopie
1.1 Overzicht
Resolutie: 200 nm (= kleinste afstand waarmee 2 punten nog
net gescheiden worden weergegeven) bepaald door:
o Objectief
o Golflengte van zichtbaar licht
Effectieve resolutie mede bepaald door natuur preparaat:
o Gefixeerd en gekleurd (hematoxyline/eosine)
o Levend met doorgaans te weinig contrast
Vergroting: product van oculair (10x) en objectieflens (4,10, 40,
100x) -> max. 1000x vergroten
1.2 Opstelling (Klaar-veld)
Meeste preparaten worden in LM bekeken met doorvallend wit licht
Bestaat uit 3 lenssystemen:
Condensor: bundelt het doorvallend licht op preparaat
Bepalen: lichtsterkte,
Objectief: kijkt met zeer korte werkafstanden naar preparaat (vergroot beeld)
resolutie, kwaliteit
Oculair: beeld navergroten en op retina projecteren
+
Verstelbare tafel
Prisma: lichtweg buigen voor comf zitpositie
Verschillende soorten:
1. Klaar-veld microscoop
2. Fase-contrast microscoop
3. Fluorescentie microscoop
1.3 Speciale lichtmicroscopen voor levende cellen
Fasecontrastmicroscopie
o Basis van faseverschuiving van licht
o Kleine faseveranderingen, ontstaan door brekingsverschillen in preparaat ->
amplitudeveranderingen (licht/donker)
o Toegepast op ongekleurde preparaten (gekweekte levende cellen of vriescoupes)
Differentieel interferentie-contrastmicroscopie (DIC / Nomarski)
o Basis van +/- interferentie van gepolariseerd licht
o 3D beeld levende cellen
Digitale microscopie
o Computerverwerking van beelden met ultragevoelige videocamera’s
o Dynamisch
Donkerveldmicroscopie
o Kleine objecten (bacteriën, organellen)
(fluorescentie)microscopen
o Zie verder
o Life cell imaging
, 1.4 principes lichtmicroscopie
Contrast verhogen
o Met kleuring:
Histologische kleuring: reduceert amplitude van bep. λ -> kleuring
o Zonder kleuring:
Verschillen in optische dichtheid -> beeldcontrast
Afwijkende brekingsindex -> faseverschuiving
Interferentie (+/-): zwart-wit beeld
1.5 voorbeeld lichtmicroscopische analyse
Kleuring darmvillus met
PAS (Periodic Acid Shiff) -> vrije suikers
Hematoxyline -> nucleïnezuren
Eosine -> NH2 groepen van EW
1.6 Fluorescentiemicroscopie
Epi-illuminaite = meest gebruikte illuminatiesysteem
Objectieflens + condensor + objectief in 1
Epifluorescentie
Activeert met excitatielicht van korte λ (ultraviolet-blauw, groen)
Fluorchrome stof in preparaat zendt emissielicht uit van langere λ (resp. groen, rood-
infrarood)
Conventioneel (met kwikdamplamp als lichtbron)
Confocale laser scanning microscopie (CLSM) (met laser als lichtbron)
1.6.1 Principes:
1. Excitatiebron: Hg of Xe lamp
2. λ – filters in een filterkubus:
Excitatiefilter
Dichroïsche spiegel (beamsplitter)
Emissiefilter of stopfilter
3. Detector: ogen of camera
fluorocroom: bv. alexa 488 (liefst aanslaan met λ 488 nm, mr je kan niet 1 λ doorlaten (je laat
bv enkel 450 tot 550 nm door), vervolgens 2 e filter: laat enkel licht toe van > 515nm alexa 488
w zichtbaar
1.6.2 Gebruik:
Aankleuren en kwantificeren
o Ion-gevoelige kleurstoffen: fluorchroom reageert met ion, kleur op basis van
concentratie ion (bv fura-2 met Ca2+ )
o Immunofluorescentie: EW detecteren mbv Ig’s gebonden aan fluorchroom
o Tagging van EW met fluorescente EW (spec EW in levende cellen detecteren)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller StudentjeGeneeskunde1. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.34. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
80467 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now