Summary
Samenvatting microscopische technieken
- Course
- Institution
Samenvatting microscopische technieken
[Show more]
Seller
Follow
elisavanmol
Content preview
Deel 1: microscopische techniekenDeel 1: microscopische technieken
Structuren waarnemen microscoop gebruiken
- 3 functies van de microscoop
Een vergroot beeld van het specimen produceren = vergroting
De details in het beeld scheiden = resolutie
Details zichtbaar maken voor het menselijke oog, voor een camera of voor
een ander waarnemingsapparaat/beeldopname-apparaat = contrast
- Belang van een microscoop
Voor het stellen van klinische diagnoses, visualiseren van structuren voor
onderwijs- of voor onderzoeksdoeleinden
- Moderne microscoop = vergroting van ongeveer 1000x en maakt het mogelijk details
waar te nemen die 0,2 m van elkaar verwijderd zijn
- Elektronenmicroscoop
Elektronen worden gebruikt i.p.v. zichtbaar licht, vergrotingen van 450000x
met een resolutie van 0,1 nm
Mensen nemen namelijk structuren waar die minimum 100-200 m van elkaar verwijderd
zijn
A. De samengestelde microscoop
Microscopen bevatten lenzen, waarvoor voor elks gebruik wordt gemaakt van de lenstheorie
(zie verder)
- Eerste microscopen ontworpen door Antoni van Leeuwenhoek waren slechts
uitgerust met 1 lens
Vandaag de dag hebben microscopen dus minstens 2 lenzen = samengestelde
microscoop
Basisprincipe van de samengestelde microscoop
- Beeld dat door de 1ste lens wordt gevormd vergroot door 2de lens, waardoor de
vergroting die verkregen wordt een stuk hoger is dan bij een enkele lens
Onderdelen van de lichtmicroscoop
Alle onderdelen worden samengehouden door een statief
Soms bevat statief ook filters en/of fotografische onderdelen
De objecttafel(=preparaattafel) is een beweegbaar gedeelte dat
uit het statief uitsteekt en waarop het preparaat geplaatst wordt
Beeld scherpstellen door tafel op en neer te bewegen
!! kan niet bij alle microscopen vb. microscopische opstellingen
voor elektrofysiologie (hier bewegen de lenzen) !!
Belichtingssysteem bestaat uit: lichtbron en condensator
Condensator = een set lenzen die de straal van de lichtbron
opvangen en ze via breking tot een coherente, relatieve smalle
lichtbundel herleiden
1
,Deel 1: microscopische technieken
- Nodig als je preparaat gelijkmatig en maximaal wilt belichten, anders zou er veel
lichtsterkte verloren gaan doordat het onderste gedeelte van de preparaattafel zou
belicht worden en niet het preparaat zelf
- In de condensator zit een condensatordiafragma
- Bij betere microscopen: ook een velddiafragma, maakt het mogelijk om de belichting
optimaal te stellen volgens de methode van Köhler
Maw het instellen van de optimale belichting telkens als we van vergroting
veranderen
Moderne microscopen hebben 3 tot 5 objectieflenzen die op een roteerbare schijf, de
objectiefverwisselaar/revolver gemonteerd zijn
- Objectieve lenzen zijn verantwoordelijk voor het grootste deel van de vergroting en
vormen het primaire beeld van het object
- Kwaliteit van deze lenzen bepaalt de kwaliteit van de microscoop
- Primaire beeld wordt een 2de keer vergroot door de oculairlenzen
Uiteindelijke vergroting wordt vergeven door
VERGRtot= VERGRobjX VERGRocl
B. Resolutie en numerieke apertuur
Resolutie = het vermogen van een microscoop om 2 punten op een coupe als afzonderlijk te
kunnen waarnemen
- Bij de beste lichtmicroscopen bedraagt deze afstand bij optimale instelling 0,2 m
Formule voor resolutie
R = /NA
- = golflengte
- NA = numerieke apertuur van de objectieflens, vb. 63x/1,4 op de lens gegraveerd
Een kwaliteitswaardemeter en wordt als volgt gedefinieerd: NA = n x sin
n = brekingsindex
= halve tophoek van de apertuurkegel
Bij gebruik van droge objectieven (medium is lucht),
zal NA steeds kleiner zijn dan 1
olie-immersielenzen, ongeveer 1.4
water-immersielenzen, 1.2
- Hoger de NA, hoe beter de resolutie (R zal kleiner worden)
NA is van groot belang voor de globale resolutie
- Hoe korter de golflengte, hoe beter de resolutie wordt
- Lage belichtingsintensiteit heeft een lagere resolutie
2
, Deel 1: microscopische technieken
C. Voorbereiding van een preparaat voor conventionele lichtmicroscoop
1 van de eenvoudigste preparaten om te maken
Een uitstrijkje van cellen in suspensie vb. bloed
bij het bestuderen van organen meestal weefselsneden (=weefselcoupes)
a. Orgaan of weefsel wordt uit het dier verwijderd en gefixeerd door perfusie (via de
bloedbaan) of immersie (onderdompelen)
Fixatieproces is nodig om degradatie van weefsel door bacteriën en enzymen
tegen te gaan
Fixatie gebeurt door chemische verbindingen (cross-linking) tussen het fixatief en
de aanwezige biomoleculen in het weefsel, zo blijft de (ultra) structuur bewaard
b. Gefixeerd weefsel wordt gespoeld
c. Gedehydrateerd in een aantal baden met een oplopende concentratie van ethanol
d. Via een aantal tussenstappen ingebed in paraffine (=hydraterende en beschermende
werking)
e. Het met paraffine geïmpregneerd weefselblokje wordt in de houder van een
microtoom geplaatst (snijdt dunne schijfjes van het weefselblokje)
Zeer dun is 2 tot 7 m dik
f. Coupe/weefselsnede wordt op een draagglaasje opgevangen en geparaffineerd met
behulp van xyleen
g. Via een omgekeerd alcoholreeks wordt het weefsel opnieuw in een waterig milieu
gebracht om gekleurd te worden
Kleuring
- Noodzakelijk om contrast te bekomen, want niet-gekleurd weefsel heeft ongeveer
dezelfde brekingsindex als glas zou in een gewone lichtmicroscoop weinig
zichtbaar zijn
- Verleent kleur waardoor de verschillende structuren gedifferentieerd kunnen worden
- Veel gebruikte kleuring is hematoxyline/eosine OF HE-kleuring
Combinatie van 2 kleurstoffen
Hematoxyline, een basische kleurstof staat bekend voor zijn affiniteit voor
zuur materiaal in het weefsel
het zal zich aan de nucleïne zuren binden en bijgevolg de celkernen
kleuren
Eosine, een zure kleurstof werd oorspronkelijk gebruikt voor kleuren van
kleding en bindt aan basische bestanddelen
h. Na de kleuring zal de gekleurde coupe terug ontwaterd worden om vervolgens
ingesloten te worden met een niet-waterig inbeddingsmedium om uitdroging te
voorkomen
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller elisavanmol. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.76. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67096 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now