Summary
Samenvatting geïntegreerd practicum menselijke genetica
- Course
- Institution
Een samenvatting van alle experimenten te kennen voor het examen samen met een lijst van alle gebruikte stoffen met hun functie.
[Show more]
Seller
Follow
larissabultena
Reviews received
Content preview
Geïntegreerd practicumEXAMEN
Gebruikte stoffen
0,9% NaCl Wordt gebruikt om de mond te spoelen. Vangt de cellen
op en is een niet-toxisch alternatief voor een fenol-
chloroform extractie. Er wordt geen water gebruikt want
water breekt de cellen open.
Lysisbuffer Zorgt ervoor dat de cel kan openbreken.
Proteïnase K Zorgt voor afbraak van nucleases -> DNA beschermen
Verzadigd NaCl Zorgt ervoor dat de eiwitten gaan neerslaan en zo
gescheiden kunnen worden van de nucleotiden die niet
neerslaan
Absolute ethanol Zorgt ervoor dat het DNA zal neerslaan
70% ethanol Dient als overgangsstap tussen absolute ethanol en
water, zodat het niet een te groot verschil is
TE-4 buffer Zorgt voor het oplossen van het DNA en biedt
bescherming van de nucleïnezuren tegen enzymatische
lysis
Agarose Polysacharide dat gebruikt wordt in de gel waarop de
stalen worden geladen
TBE buffer Zorgt ervoor dat het DNA gedeprotoneerd blijft en
opgelost blijft in water
GelRed Wordt gebruikt om DNA te visualiseren
SLM Bevat broomfenolblauw dat voor visualisatie zorgt, het
bevat ook sucrose wat het staal zwaarder maakt
waardoor het naar beneden zal zakken op de gel
Steriel water Oplosmiddel
PCR-buffer Creëert een optimaal milieu voor de reactie, de kleurloze
(kleurloos) buffer wordt gebruikt omdat er nog verder gewerkt moet
worden met het PCR-product
MgCl2 Fungeert als een cofactor in de PCR-reactie, versterkt de
enzymatische activiteit van DNA-polymerase
Forward primer en Binden op een stukje template DNA, worden gebruikt om
reverse primer het stuk DNA af te bakenen dat geamplificeerd moet
worden
dNTP’s Bestaat uit de 4 basisnucleotiden (dATP, dCTP, dGTP,
dTTP), bouwstenen voor de nieuwe DNA-strengen
DNA Taq DNA-polymerase dat bestand is tegen hoge
polymerase temperaturen, zal nieuwe nucleotiden rekruteren om een
nieuwe streng te vormen
PCR-buffer (groen) Creëert een optimaal milieu voor de reactie, in deze
buffer zit al ladingsbuffer. Hier kunnen mogelijk
downstream effecten optreden dus zal alleen gebruikt
worden als er niet verder met het PCR-product gewerkt
moet worden.
Na acetaat Helpt bij het neerslaan van DNA, wordt gebruikt i.c.m.
ethanol
pUC19 controle Bevat een gen dat codeert voor resistentie tegen
vector ampicilline, wordt gebruikt om de transformatie
, efficiëntie te bepalen
SOC-medium Glucose-rijk groeimedium
Zoutoplossing Zal de negatieve ladingen neutraliseren waardoor PCR-
product en plasmide vector dichter bij elkaar komen
X-gal Is aanwezig in de agar en wordt gebruikt om bacteriën te
identificeren die β-galactosidase produceren. X-gal is
kleurloos, maar wanneer β-galactosidase aanwezig zal X-
gal afgebroken worden en zo een blauw product vormen.
IPTG Verwijdert de repressor van lac-operon om genexpressie
te introduceren
Ampicilline Antibioticum
LB-medium Voedingsrijk groeimedium
Suspensiebuffer Zorgt ervoor dat de pellet opgelost kan worden
Lyse buffer Zorgt voor het openbreken van de cellen zodat plasmide-
DNA vrijkomt. SDS lost de celmembranen op en zal
eiwitten denatureren, NaOH zorgt voor verhoging pH en
denatureert DNA en eiwitten alsook afbreken celwanden.
Bindingsbuffer Zorgt ervoor dat het DNA kan binden aan de filter
Wasbuffer Zal de achtergebleven bindingsbuffer wegwassen
Elutiebuffer Wordt gebruikt om het gezuiverde DNA van de filter te
krijgen
M13-primer Gebruikt bij cycle sequencing die bindt op de M13
sequentie
Big Dye buffer Optimalisatie van milieu van cycle sequencing
Big Dye Kleurstof voor het labelen van PCR-product
Sybr green mix Groen fluorescent label om DNA te labelen
RE buffer Buffer voor restrictie-enzym
HindIII Restrictie-enzym
Experiment 1
Principe DNA-isolatie
Er zijn verschillende methodes om DNA-extractie te doen uit cellen of weefsels
- Fenol-chloroform extractie: veel gebruikt, maar producten zijn giftig voor
mens en milieu
- Extractie via DNA-isolatie kit met spin kolommen: dure methode, gebruikt
glasvezelfilters om DNA te laten binden
- Extractie met behulp van zoutprecipitatie: veilige methode en er is geen
kit nodig
Om te beginnen met de DNA-isolatie wordt er een zoutoplossing gebruikt om
cellen te krijgen van het wangepitheel. Deze cellen mogen nog niet kapot gaan,
dus daarom gebruiken we een zoutoplossing en geen water (zoutoplossing is
fysiologisch). Vervolgens gaat er gecentrifugeerd te worden om de cellen in een
pellet te vormen. Deze pellet wordt opgelost in een lysisbuffer, om vervolgens
proteïnase K toe te voegen en dit te laten incuberen. Door de lysisbuffer zal de
inhoud van de cellen vrijkomen, maar door proteïnase K zal het DNA beschermt
blijven. Verzadigd NaCl zal nu toegevoegd worden waardoor de eiwitten zullen
neerslaan, maar niet het DNA. Dit wordt weer gecentrifugeerd en in het
supernatans zit het opgeloste DNA. Het supernatans wordt overgebracht in een
nieuw epje waarin we absolute ethanol aan toevoegen (neerslaan DNA). Hierna
wordt het DNA-vlokje gedipt in 70% ethanol en vervolgens in TE -4 buffer om het
DNA weer op te lossen. Om het DNA-vlokje op te vissen wordt een glazen haakje
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller larissabultena. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.31. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
56326 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now