Moleculaire diagnostiek hebben we het over de analyse van het aantonen van DNA en RNA-
moleculen. Heel soms worden er nog wel eiwitten meegenomen maar bijna niet.
Het is een analyse van nucleïnezuren en dan vooral RNA en DNA.
We kunnen te maken hebben met directe of indirecte diagnostiek. Bij direct ben je het
gen/genoom/eiwit aan het aantonen of een pathogeen direct aan het aantonen. Dit is bij CHP
erg belangrijk. Bij de indirecte methode ben je de respons op iets aan het aantonen.
Voor- en nadelen van de directe en indirecte methodes:
- Bij de isolatie van pathogenen is het nadeel dat de kweek lang duurt en voordeel is dat het…
- Bij de antigenen/antilichamen en eiwitten hierbij is de reactie antigen-antilichaam heel
belangrijk omdat je dan kan zien dat specifieke eiwit is aanwezig. Je kunt niet direct zien of
het nieuw is of niet en moet je dus een aantal keer vergelijken waardoor dit een nadeel is van
deze methode.
- Bij het aantonen van een antilichaam gebruik je een ELISA bijv. door een fluorescentie
niveau weet je dan hoeveel antilichaam er aanwezig is.
- Bij de eiwit detectie kun je een MALDITOF gebruiken maar ook een Immuuno kleuring. De
MALDITOF is heel snel waardoor dat een voordeel is maar de prijs om een MALDITOF aan
te schaffen dat is wel prijzig.
- Bij de Genome detectie wordt er gebruik gemaakt van een PCR, RT-PCR of sequencing.
Voordeel is dat PCR niet heel duur is maar als je bijv. de sequencing erbij doet dan kost het
weer meer, het is heel specifiek en je krijgt heel veel informatie. Maar het kost heel veel tijd
om alle data te bestuderen.
De belangrijke aspecten van een diagnostische test
- Het moet heel specifiek zijn
- Het moet nauwkeurig/robuust zijn. (Onder welke omstandigheden je de test uitvoert het
resultaat moet altijd hetzelfde zijn.
- De kosten zijn belangrijk.
- Snelle testen willen we graag omdat we graag het minste tijd besteden aan de test.
- Gevoeligheid is ook belangrijk omdat als je iets wilt aantonen van bijv. een genetische
aandoening moet je wel iets kunnen aantonen met de test.
, - Niet al te ingewikkeld en dat de meeste lab personeel het wel allemaal kan. Ze kunnen het
erop trainen
- Geschikt lab is ook belangrijk, heb je alle benodigdheden om de testen uit te voeren. En ook
alle apparatuur is belangrijk die je nodig hebt.
Nucleïnezuur analyse
Je moet beginnen met het isoleren van de nucleïne zuren. Hierbij maakt je
bijv. weefsel kapot door middel van bijv. enzymen. Je hebt bij de PCR
altijd DNA nodig waarna je dan sequencing kan uitvoeren.
Je hebt voor het proces van de isolatie in het lab een apparaat namelijk een
automated NA isolatie. Hierbij worden van die magnetische bolletjes
gebruikt die het nucleïne zuur kunnen binnen, ze kunnen door middel van
een magneet die bolletjes op de bodem houden waardoor het wassen
makkelijker gaat. Dit apparaat werkt met 96 wells platen hierbij kun je een
aantal verschillende wells platen erin plaatsen. Het voordeel van dit
apparaat is dat het altijd op dezelfde manier wordt uitgevoerd. Controle zijn
heel belangrijk in de diagnostiek, want als iets negatief is weet je niet zeker
of het negatief is of dat er toch iets mis was gegaan. Als er dan iets mis is
gegaan moet je het opnieuw uitvoeren.
Na het isoleren komt er een analyse stap. Dit wordt niet vaak meer gebruikt omdat isoleren
toch vaak met een apparaat wordt uitgevoerd. Als je de kwaliteit en kwantiteit wil bekijken
dan gebruik je een UV-spectrofotometer. Of als je het wel kijken op de een gel waar het
desbetreffende gen ligt dan gebruik je dus gel elektroforese. Vaak wordt er toch gebruik
gemaakt van een amplificatie analyse stap waarbij een PCR of sequencing wordt uitgevoerd.
PCR-amplificatie
Het verschil tussen de conventionele en een real-time PCR?
Een conventionele PCR is kwalitatief en soms semi-kwantiteit. De Q-PCR (real-time PCR) is
quantitatief. Dit geeft aan hoeveel input aan bijv. DNA erin zat.
De conventionele PCR is goedkoper, omdat je primers toevoegt en dan op gel zetten en dan
bandje bekijken. Dit is een open manier.
Q-PCR is duurder omdat je er fluorescentie aan de primers toevoegt omdat je het in de gaten
wilt houden. Het is een gesloten systeem en gebruikt ook geen gel.
Bij de conventionele doe je ongeveer 40-45 cycli, deze PCR is gevoeliger.
Bij de Q-PCR volg je de reactie in real time waar je benieuwd bent naar de exponentiële fase,
deze PCR is minder gevoelig.
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller loisjansen2000. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $9.29. You're not tied to anything after your purchase.