Summary
Samenvatting practica cursus immunologie
- Course
- Institution
dit is een samenvatting van de cursus over de practica's van immunologie
[Show more]
Seller
Follow
diergeneeskundestudentjee
Reviews received
Content preview
Practica immunologie,Inhoud
Practica immunologie..........................................................................................
Hoofdstuk 1: Eigenschappen van antistoffen.........................................................
1 De antigeen-antistofbinding.................................................................................................
Gevolg van Antigeen-antistof verbinding.............................................................................
2. Affiniteit en aviditeit............................................................................................................
Hoofdstuk 2: Aantonen antistoffen.......................................................................
2.1 Precipitatie........................................................................................................................
Algemeen principe..................................................................................................................
2.2 Agglutinatie..................................................................................................................... 10
Algemeen principe................................................................................................................ 10
2.3 Neutralisatie.................................................................................................................... 15
2.4 De complement-bindingsreactie...................................................................................... 16
2.5 Ligandbindingstesten...................................................................................................... 17
Hoofdstuk 3: Evaluatie van aantal en functies van immuuncellen.........................24
Appendix: lijst met cd-moleculen.......................................................................................... 36
Hoofdstuk 1: Eigenschappen van
antistoffen
1 De antigeen-antistofbinding
Komt tot stand dankzij niet covalente krachten (zwak) (Figuur 1)
Covalente krachten -> wanneer antigeen (Ag) en antilichaam (Al) zeer dicht benaderen
Primaire binding tss antigeen en antistof gebeurt door Coulombse krachten en treedt snel op
De secundaire binding gebeurt trager en kan gedurende uren tot dagen blijven toenemen
Wnr antigeen en antistof korter komen ku H-bruggen gevormd w tss hydrofielen (-OH, -NH2, -COOH)
H-bruggen -> minder vlug waterig milieu doordat water deelneemt aan de vorming waterstofbruggen
Coulombse-krachten (elektrostatische krachten)
Tegengesteld geladen ionengroepen die elkaar aantrekken
1
, De kracht is omgekeerd evenredig met het kwadraat van de afstand tss ladingen
Belangrijk bij begin van binding tss antigeen en antistof en weinig belangrijk in stabiliteit Ag-Al binding
Deze bindingen zijn effectief over een afstand van 100 Å
Van der Waals-krachten
Aantrekkingskracht tss oscillerende dipolen (dwz. afwisselend + en - ) in één atoom en geïnduceerde
oscillerende dipolen in een ander dipool
Rol in primaire binding
Werkzaam tot afstand van 1000 Å
Omgekeerd evenredig met zevende macht van de afstand tss moleculen
Zwakker dan de coulombse krachten
Waterstofbruggen
Zwakke en omkeerbare interacties tussen hydrofiele groepen
Geringe bijdrage in stabiliteit van Ag-Al binding
Over zeer korte afstand werkzaam (1 tot 1.5 Å; zie hoger) en daardoor een rol in secundaire binding
Apolaire of hydrofobe krachten
Werkzaam over korte afstand. Als van der Waals krachten en waterstofbruggen de moleculen dichter
naar elkaar toe trekken w water uitgedreven en kunnen hydrofobe krachten optreden
Gevolg van Antigeen-antistof verbinding
Minder energie nodig om binding van antistof en antigeen te verhinderen dan om een bestaande
binding te verbreken
Bv: als men bij een affiniteitszuivering de binding wil verbreken, moet dit zo snel mogelijk
Hoe langer men de binding laat plaatsgrijpen, hoe sterker de binding
Het is een evenwichtsreactie met Ka als reactieconstante bij associatie en Kd deze bij dissociatie
Ka
Antigeen (Ag) + As Ag-As
Kd
2. Affiniteit en aviditeit
Affiniteit van een antistof: het vermogen van één antistofmolecule om aan één epitoop te binden
Affiniteit is dus de mate waarin één antistof met zijn paratoop bindt aan het epitoop van het antigen
Het gaat om een interactie ter hoogte van één individuele bindingsplaats
De affiniteit = evenwichtsconstante Ka
2
, Ka hoog, weinig antigeen nodig om 50% van de bindingsplaatsen van de antistoffen te verzadigen
Affiniteitsconstante is dus een maat voor affiniteit van antistof voor één epitoop van een antigeen
Zegt niets over de snelheid waarmee de binding zal gebeuren
Is de affiniteitsconstante gekend van een monoklonaal antistof in een bepaalde immunochemische
test voor een epitoop van een welbepaald antigeen, dan kan de hoeveelheid vrij antigeen kwantitatief
bepaald worden
De affiniteits(associatie)constante van Ag en As w beïnvloed door een aantal reactieomstandigheden:
• pH: het effect pH wijzigingen hangt af van de aard van niet covalente krachten
• Ionensterkte: affiniteitsconstante kan verhoogd w door ionensterktete verlagen van de buffer
waarin de reactie plaatsgrijpt. De affiniteitsconstante kan verlaagd worden door de ionsterkte te
verhogen indien de binding vnl uit Coulombse krachten bestaat. Bestaat ze echter voornamelijk
uit hydrofobe bindingen dan kan de bindingssterkte toenemen.
• Temperatuur: Effect op reactiesnelheid en op affiniteitsconstante. Door temperatuur te verlagen,
kan reactiesnelheid trager verlopen maar ook sneller verlopen. Verlagen T° doet de affiniteit en
aviditeit voor een groot aantal immuunreacties toenemen. Bij sommige immunologische testen
(vb. Western blot) zal de herkenning van het Ag door de As specifieker verlopen wanneer er
gedurende lange tijd op lage temperatuur wordt geïncubeerd (overnacht bij 4°C) dan wanneer er
korter geïncubeerd wordt op kamertemperatuur
• Binding van een antigeen aan een vaste fase: De affiniteit wordt beïnvloed door de lokale
concentratie van antigeen. Een hoge lokale concentratie verhoogt de kans dat een antistof dat
loskomt van een antigeen opnieuw zal binden aan een aangrenzend antigeen. De binding van
een antigeen aan een vaste fase verhoogt de lokale concentratie en daardoor de
affiniteitsconstante.
• Vermindering van de oppervlaktespanning: wordt bekomen door detergentia toe te voegen (o.a.
Tween). Dit heeft een effect op de van der Waals krachten die zowel kunnen toenemen als
kunnen afnemen.
• Reactietijd: toename van de reactietijd doet van der Waalse krachten, waterstofbruggen en
hydrofobe-bindingen toenemen.
Waterontrekkende stoffen (zoals ammoniumsulfaat) en niet-ionische polymeren (zoals
polyethyleCoulenglycol (PEG)): verhogen de binding doordat ze een deel van het water
onttrekken aan de antigeen- en antistofmoleculen die daardoor in een kleiner volume
terechtkomen. De antigeen- en antistofmoleculen worden dus in een kleiner volume
geconcentreerd wat de reactiviteit verhoogt. Zoals eerder vermeld kan een antistof tegenover
één epitoop kruisreageren met een verschillend epitoop. In dat geval is de affiniteit van het
antistof voor het 2de epitoop geringer dan voor het oorspronkelijk epitoop. De antistoffen die
kruisreageren hebben een lage specificiteit
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller diergeneeskundestudentjee. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $13.43. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
50990 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 15 years now