Samenvatting BMW Genoom - HC uitwerkingen - deel II
20 views 0 purchase
Course
Genoom (BMW21614)
Institution
Universiteit Utrecht (UU)
Book
Molecular Biology of the Cell
Dit document bevat de uitwerkingen van de hoorcolleges van deel II van de cursus Genoom Biomedische Wetenschappen (BMW21614). Het document kan gebruikt worden als voorbereiding op deeltoets 2.
Summary Molecular Biology of the Cell 2 (book) (WBFA007-04)
Summary Regenerative Medicine
All for this textbook (62)
Written for
Universiteit Utrecht (UU)
Biomedische Wetenschappen
Genoom (BMW21614)
All documents for this subject (47)
Seller
Follow
ivanalansweers
Reviews received
Content preview
Genoom HC - Deel II – uitwerkingen
Hoorcollege 1
Elke analyse meet iets op een bepaald niveau.
Bestuderen in de cel = in vivo (in leven)
Bestuderen in een reageerbuis = in vitro
Hoorcollege 2 – 14-01-2019
P53null cellen zijn cellen van een humane cellijn die geen p53 bevatten maar waar wél extra DNA in
kan worden toegevoegd om overexpressie van p53 te creëren.
Heatshock zorgt voor een instabiele celwand zodat DNA de celwand van de hostcel kan passeren
Drukverschil wordt gecreëerd waardoor het DNA de cel kan binnendringen omdat de fosfolipiden van
de bi-laag van de celwand gedestabiliseerd worden.
E.coli moet vermeerderen groeien
DNA isolatie gel-elektroforese, isolatie & sequencing
Site directed mutagenesis expres een mutatie aanbrengen in een primer
Forward primer bindt aan template streng
5’ primer 3’
3’ template streng 5’
Reverse primer (moet nog complementair worden gemaakt en als het ware omgekeerd (van
3’naar5’)
5’ streng 3’
3’ primer 5’
Taq polymerase ipv DNA polymerase
Pas na 2 cycli heb je vermeerde target DNA (!)
, Transformeren met bacteriën
Transfectie eukaryotische cellen
Genomische DNA bank:
- Elk stukje uit het genoom, exons, introns, repetitief DNA, promotorgebieden, etc.
cDNA bank:
- mRNA van het ‘genoom’, niet elk stukje DNA, alleen eiwit-coderend DNA
- weefsel- en celtype-specifiek hierdoor dan ook meer cDNA’s
Gekloneerd DNA met onbekende sequentie kun je alsnog heel gemakkelijk sequensen omdat je dit in
de MCS hebt gezet, je hoeft dus puur primers te ontwikkelen voor de MSC en die dus complementair
zijn aan de stukjes MCS.
Cmv-promotor = sterke promotor van virussen nodig voor overexpressie van eiwitten
Fusie-eiwit
- eiwit met een stukje daaraan vast, in-frame
- stopcodon haal je weg, nieuwe aminozuurcode wordt ingebouwd
- HIS-tag (bindt heel sterk aan glutation, bevat veel histidines) of GST-tag
Reporter-gen
- Plasmide bevat één MCS maar twee promotors (U6 en Cmv)
- ‘Deze cel bevat het juiste plasmide’ boodschap dat de transformatie/transfectie gelukt is,
cel wordt groen opgelicht
Sh-RNA (short hairpin RNA)
- Stukje RNA dat met zichzelf kan loopen + terminatie sequentie van heel veel TTTTTT
- DNA inbrengen waar RNA uit komt, loopt met zichzelf en is complementair aan elkaar, shRNA
- Wordt direct herkend door eiwitten voor mRNA degradatie/RNA-interferentie etc.
- Zo wordt mRNA afgebroken en kan worden onderzocht hoe de cel reageert als een bepaald
eiwit niet tot nauwelijks tot expressie kan worden gebracht omdat het mRNA wordt
afgebroken door shRNA
1. Synthetische siRNA’s direct inspuiten (transfecteren)
2. Cellen transfecteren met een plasmide dat codeert voor het shRNA
3. Een gemodificeerd virus dat na infectie integreert in het genoom en codeert voor het shRNA
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller ivanalansweers. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.21. You're not tied to anything after your purchase.
