Samenvatting van het boek Biomedical Science Practice van Ahmed, Glencross & Wang (H7.7, H9.1 t/m 9.3, H9.7, H9.9, H11.1, H12.7 en H12.9) en het PCR- handboek (H1, H2 en H4).
Biomethoden samenvatting jaar 2
medische diagnostiek
H7.7
● Primaire fluorescentie→ stoffen die onder UV licht vanuit zichzelf
fluoresceren
● Secundaire fluorescentie→ stoffen die fluorescentie kleurstoffen bevatten
die onder invloed van UV licht kunnen fluoresceren
● Meest gebruikte lichtbronnen in fluorescentie microscopen zijn: high pressure
mercury vapour of xenon arc lampen
● Halogeenlampen kunnen een hoge hoeveelheid UV uitstralen, maar vallen in het
blauwe spectrum, dus zijn daarvoor niet algemeen
● Soorten microscopen
○ Transmissie: de lichtbron bevindt zich onder het
sample
○ Incident: sample wordt van bovenaf verlicht, tegen een
zwarte achtergrond
● Transmissie
○ Excitatie filter: tussen de lichtbron en de condensor
○ Barrier filter: in het oogstuk
○ Het excitatie filter zorgt ervoor dat het sample wordt
verlicht door een bepaalde hoeveelheid UV licht en
golflengte
○ De barrier filter zorgt ervoor dat alleen het
geëmitteerde licht wordt doorgelaten en niet
het ongebruikte UV licht→ lastig, omdat het
signaal van fluorescentie hierdoor lager wordt
■ Alternatief is een zwarte condensor, waardoor
alleen het geëmitteerde licht wordt weerkaatst
● Incident
○ Sample wordt vanaf bovenaf verlicht→ gaat
eerst door een excitatie filter en daarna door
een prisma of dichromatische spiegel naar het
sample, zichtbaar licht wordt doorgelaten in
tegengestelde richting van het excitatielicht
○ Resultaat: licht sample tegen een donkere achtergrond
○ Voordelen: geeft een intensiever resultaat (lichter,
namelijk geen barrier filter) en er kunnen ook andere
transmissie bronnen worden gebruikt
● Toepassing fluorescentie microscopie: immunofluorescence
(antigeen- antilichaam interacties met fluorochromen)
1
,H 9.1 t/m 9.3
● Radiatie is de emissie of transfer van energie als elektromagnetische golven of
deeltjes
○ Deeltjes zijn vaak fotonen
● λ=c/vc/v
○ λ=c/v golflengte
○ c=c/v lichtsnelheid
○ v=c/v frequentie
● E=c/v h*c/λ=c/v h * v
○ E=c/v energie
○ h=c/v constante van Planck
● Radiatie kan worden geabsorbeerd of verspreid, wanneer
deze een interactie aangaat met materie
○ Rayleigh scatter (verspreiding) houdt in dat een
foton een botsing aangaat met een atoom of
molecuul en daardoor van richting verandert
○ Kan worden gebruikt om de moleculaire massa
van deeltjes te bepalen
● Chromofoor=c/v een deeltje dat bij absorptie van energie geëxciteerd raakt
● Fluorescentie=c/v wanneer een deeltje in geëxciteerde staat een foton (of deeltje)
verliest en daardoor energie kwijtraakt
○ Verschil met fotofluorescentie→ deze blijft namelijk doorgaan met
het emitteren van licht (neemt geleidelijk af) terwijl bij fluorescentie
dit direct wegvalt wanneer het excitatielicht wordt weggehaald
● Quantum=c/v de kleinste hoeveelheid individuele energie (die wordt uitgezonden of
geabsorbeerd)
● Om een foton te kunnen absorberen, dient de hoeveelheid energie van de foton
gelijk te staan aan het energieverschil van de ground state en de geëxciteerde staat
● Een transitie is het schakelen tussen energieniveaus
● De ground state is lager in energie niveau dan de geëxciteerde staat (dus de
geëmitteerde staat is lager)
H 9.7
● De golflengte van het geëxciteerde licht
is korter dan de golflengte van het
geëmitteerde licht
○ Excitatie heeft meer energie
○ Emissie heeft minder energie
● Het verschil tussen de golflengten van
excitatie en emissie wordt stokes shift
genoemd
● Fluorimeter
2
, ○ Een monochromator (in een spectrofotometer) kan de juiste golflengte kiezen
die door het cuvet gaat
○ De tweede monochromator zorgt ervoor dat alleen het geëmitteerde licht door
de detector gaat
○ Voordeel: specifieker dan UV spectrofotometer/ zichtbaar licht en kan de
nauwkeuriger de excitatie golflengte bepalen
○ Nadeel: gevoelig voor pH verandering en contaminatie
○ Toepassing: bij het detecteren van PKU
○ Quenching: wanneer het geëmitteerde licht minder is dan verwacht, kan
komen door absorberende stoffen of stoffen die interfereren met de energie
transfer
H 9.9
● Massaspectrometrie meet de massa/ lading verhouding van deeltjes
○ De moleculaire massa wordt vaak uitgedrukt in Da
■ 1Da staat gelijk aan de massa van 1 H atoom, neutron of proton
○ Kan ook informatie geven over de chemische structuur of primaire structuur
● Massaspectrometrie
○ Bestaat uit drie elementen: ionizer, analyser en detector
○ Alle onderdelen bevinden
zich in vacuüm van 10-2 tot
10-10 Pa om botsingen
tussen de deeltjes te
voorkomen→ verhoogt
de nauwkeurigheid
○ Deeltjes moeten worden
geïoniseerd door het
koppelen van een H+ of het
verwijderen van een H+
(gebeurd in de ionizer)
● Ionisatie technieken
○ MALDI
○ Electron ionization: elektronenstraal door het analyt laten
○ Chemical ionization: een gas laten botsen met het analyt
○ Fast atom bombardement: mengen met een niet vluchtige matrix en bestralen
met elektronen met veel energie (vaak van een gas als xenon of argon)
● Analysers
○ Quadrupole: bestaat uit vier circulaire staven, door het magneetveld scheiden
de ionen op basis van stabiliteit
○ Time of flight: elektrisch veld gebruikt om de ionen dezelfde kinetische
energie te geven, de snelheid is verschillend per ion
○ Quadrupole ion- trap: door voltage gescheiden
● Detectors
○ De waarde is de m/z ratio
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller cheyenne_. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.91. You're not tied to anything after your purchase.
