Other
Biochemische Laboratoriumtechnieken
- Course
- Institution
Samenvatting Biomedische Laboratoriumtechnieken Deel 3: Chromatografie
[Show more]
Seller
Follow
amberdams
Reviews received
Content preview
1 Chromatografie1.1 Inleiding
LPC/FPLC= Grote biomoleculen zuiveren → DNA en eiwitten.
1.2 Begrippen en formules
1.2.1 Begrippen
Stationaire fase Kolompakking
Mobiele fase Solvent, eluens
Elutie Verwijderen product van kolom door oplossen in eluens
Eluaat Eluens dat uit kolom komt
Dode tijd Tijd die solvent nodig heeft om door de kolom te migreren
Retentietijd (tR) Tijd tussen opbrengen staal en piekmaximum
Netto retentietijd Tijd tussen solventpiek en piekmaximum
Schotelgetal (N) Maat voor de efficiëntie van de kolom voor één component
Resolutiefactor Scheidingscapaciteit van de kolom
1.2.2 Formules
𝑡𝑟
Schotelgetal 𝑁 = 16. [ ]2 Smalle of brede pieken
𝑤
𝐿
HETP 𝐻=𝑁 Hoogte equivalent met theoretische plaat
𝐿
𝑢= (mobiele fase)
𝑇𝑚
Lineaire snelheid
𝐿
𝑣 = 𝑇𝑟 (product)
′ ′
′ ′ R = 1: 𝑤1 + 𝑤2 = 2(𝑡𝑅2 − 𝑡𝑅1 )
𝑡𝑅2 − 𝑡𝑅1
Resolutiefactor 𝑅 = 2. R < 1: overlap tussen pieken
𝑤1 + 𝑤2 R > 1: goede scheiding
𝑣 𝑡𝑚
Retentiefactor 𝑅𝑓 = =
𝑢 𝑡𝑟
′ = selectiviteitsfactor = efficiëntie van
𝑡𝑅2
Relatieve retentie 𝛼= ′ fasensysteem → afstand tussen pieken.
𝑡𝑅1
Hoe groter , hoe verder pieken van elkaar zijn
𝐶𝑠
Verdelingscoëfficiënt 𝐾 =
𝐶𝑚
𝐶𝑠 . 𝑉𝑠 𝑉𝑠
Capaciteitsfactor 𝑘′ = = 𝐾.
𝐶𝑚 . 𝑉𝑚 𝑉𝑚
1.3 Oplossend vermogen van een kolom
- Schotelgetal (efficiëntie van de kolom)
- Relatieve retentie (efficiënt van die fasensysteem)
AD Biochemische Laboratoriumtechnieken – Deel 3: Chromatografie 1
, klein → kleine afstand tussen
twee pieken
groot → grote afstand tussen
twee pieken
N klein → brede pieken
N groot → smalle pieken
Beste? groot en N groot. Smalle
pieken die ver van elkaar liggen.
1.3.1 Invloed van de kolom
Van Deemtervergelijking:
𝐵
𝐻 = 𝐴 + + 𝐶. 𝑢 → T = cte
𝑢
𝐶′
𝐻 = 𝐴 + 𝐵′ . 𝑇 + → µ = cte
𝑇
Eddy-diffusie (A):
Wanneer gelijke moleculen niet allemaal dezelfde weg afleggen → niet allemaal dezelfde snelheid →
zoneverbreding.
Goede kolom= relatief kleine beads met gelijke grootte.
Longitudinale diffusie (B) :
Diffusie van de component in de mobiele fase → zoneverbreding.
Minder diffusie bij hogere elutiesnelheid.
Weerstand tegen stofoverdracht (C):
Grote elutiesnelheid zorgt voor een onvolledig evenwicht → zoneverbreding.
A: onafh van u → horizontale rechte
B: afh van u → dalende rechte (lineaire snelheid)
C: afh van u → stijgende rechte
Zwarte volle lijn: netto van drie parameters → mag
geen te grote longitudinale diffusie en geen
onvolledige uitwisseling.
AD Biochemische Laboratoriumtechnieken – Deel 3: Chromatografie 2
, 1.3.2 Invloed fasensysteem
1.3.2.1 Capaciteitsfacto, k’
= maat voor de vertraging van de component door de stationaire fase.
- Hoe groter k’, hoe groter scheidingstijd
- Ideale k’-waarden liggen tussen 1 en 5
1.3.2.2 Relatieve retentie of scheidingsfactor
= maat voor de selectiviteit van het fasensysteem.
𝑡 ′ 𝑅2
- 𝛼 = 𝑡 ′ 𝑅1, waarbij t’R2 > t’R1
𝑘′2
- 𝛼 = 𝑘′1
1.3.3 Invloed van k’, en N op de resolutie R
𝛼−1 𝑘′2 1 𝐿
𝑅= . ′ . √
𝛼 𝑘 2+1 4 𝐻
- Indien R < 1 → R verhogen door N, k’ of te verhogen
- Hoge → goede resolutie
- R maal 2 → lengte kolom maal 4
- N zit in H
Voorbeeld:
afname k’ → afname resolutie
toename k’ → toename resolutie
afname N → bolle pieken
toename N → scherpe pieken
afname → korte afstand tss pieken
toename → lange afstand tss pieken
1.4 Indeling chromatografie
Zuivering van biomoleculen → gebruik van verschillende
chromatografietechnieken.
Elke stap op 4 punten optimaliseren:
Resolutie, opbrengst, snelheid en capaciteit.
→ Deze 4 punten zijn onderling met elkaar verbonden.
AD Biochemische Laboratoriumtechnieken – Deel 3: Chromatografie 3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller amberdams. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $7.05. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
78075 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now