Summary
Samenvatting theorie toolbox - biotechnologie
- Course
- Institution
het onderdeel toolbox van biotechnologie 1 samengevat
[Show more]
Seller
Follow
fraukevanmeulder
Content preview
Toolbox biotechnologie: Hoofdstuk 3PCR = polymerase chain reaction / polymerase ketting
reactie
Er is voldoende DNA nodig om een duidelijk bandenpatroon te kunnen herkennen
Belangrijke tool om 1 stukje DNA/RNA in vitro miljoenen keer te vermenigvuldigen in korte tijd (± 2u)
lijkt erg op DNA replicatie in natuur
amplificatie = kleine hoeveelheden DNA vermenigvuldigen
kan zeer specifiek een bepaalde regio van de DNA sequentie detecteren
Toepassingen PCR
Diagnose ziekte en opsoren van genen
Identificatie bacteriën en virussen als er niet genoeg startmateriaal is om het direct op gel te zetten
om aan te tonen wat de ziekteverwekker is
Covid-19 word gediagnosticeerd via een PCR test
Er word een DNA-extratie gedaan van een neus-keelswap met viraal materiaal waar men
vervolgens een PCR reactie op gaat uitvoeren die zeer specifiek is voor Covid-19
Forensisch onderzoek
Vaak zeer weinig DNA materiaal best eerst vermenigvuldigen vooraleer men een deftig
onderzoek kan voeren
Authenticiteit levensmiddelen
GMO’s van bv plantencellen om na te gaan of het organismen (plant) wel degelijk een GMO
plant is of natuurlijke plant
PCR werking en benodigdheden
DNA template = waaruit het te onderzoeken stukje DNA (Target DNA) komt
Primers = enkelstrengig / single-stranded (ssDNA) dat template DNA gaat afbakenen tot target DNA
DNA polymerase = enzym dat ervoor zorgt dat de enkele streng word aangevuld tot een dubbele
streng = verlengen van keten. Kan dit alleen doen als er bouwstenen aanwezig zijn
Bouwstenen = dNTP’s of nucleotiden
Buffer = omdat de DNA polymerase zich in een bepaald medium moet bevinden
Thermocycler = toestel met een thermoblok waarin men snel temperatuurschommelingen kan
teweegbrengen. In deze thermoblok kan men de typische kleine PCR epjes steken (0,5ml)
De 3 stappen van PCR
Denaturatie = dsDNA wordt ssDNA
Annealing = vasthechten van primers (hybridisatie)
Extension / elongatie = verlenging van de keten
Denaturatie bij 95°C
Het splitsen van dsDNA naar ssDNA zodat primers kunnen hechten in volgende stap
waterstofbruggen tussen beide ketens worden verbroken maar covalente bindingen blijven
onaangetast
Annealing / vasthechten primers / hybridisatie bij 50 – 65°C
Vasthechten van primer aan ssDNA
Temperatuur hangt af van welke primer gebruikt word (hoe nucleotidesequentie is opgebouwd)
2 verschillende primers in verschillende richtingen = forward en reverse primer
DNA polymerase heeft startpunt nodig in de vorm van een stukje dsDNA = primers
Primers = kleine stukjes ssDNA, ± 15 tot 40 bp lang, die precies complementair zijn aan de
uiteinden van het stuk DNA waarin we geïnteresseerd zijn
primerdesign = het opleggen van specificaties aan de primers
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller fraukevanmeulder. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.28. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
67474 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now