Summary
HPLC Samenvatting - HPLC1
- Course
- Institution
Samenvatting van 8 pagina's voor het vak HPLC1 aan de HZ (HPLC Samenvatting)
[Show more]
1 review
By: sarahalagha2 • 11 months ago
Seller
Follow
sachagelissen
Reviews received
Content preview
HPLC1 SamenvattingLes 1
HPLC
- Hoge prestatie vloeistofchromatografie vroeger: hoge druk vloeistofchromatografie
- Buis met pakking stationaire fase
o Pakking bestaat uit silica
Niet-gemodificeerde silica = polair Normal-HPLC (N-HPLC)
Gemodificeerde silica = apolair Reversed Phase-HPLC (RP-HPLC)
Het omzetten van N-HPLC in RP-HPLC heet endcapping. Hierbij wordt
elke OH-groep omgezet in een niet-polaire groep
Er bestaan meerdere vormen van silica
Nadeel: bij een hoge pH zal er hydrolyse van de silicagel plaatsvinden,
waardoor het niet meer geschikt is voor HPLC
Dit kun je zien door snelle achteruitgang in efficiëntie, meer
piekverbreding en verhoging van de druk
- Doorstromen met vloeistof mobiele fase
o Bestaat meestal uit water, waterige bufferoplossing, water en organisch oplosmiddel
en mengsels van organische oplosmiddelen (vaak ook in gradiënt).
o Eluent moet van tevoren ontgast en gefiltreerd worden.
Ontgassing bijv. door doorstroming met helium
Voorkomt storingen aan de apparatuur
Ook de pomp moet stofvrij zijn.
- Stof verdeelt zich over mobiele en stationaire fase
o De stationaire fase vertraagt verschillende componenten
- Je wilt hoge schotelgetallen krijgen (>10000), dus lage schotelhoogtes kleine
deeltjesdiameter (dp) pakking nodig
L
o H=
N
H = schotelhoogte
N = schotelgetal
L = lengte kolom
o Om vloeistof toch er doorheen te krijgen, is er hoge (pomp)druk nodig.
- Apparatuur
, - Pomp
o Debiet (flow) F
F tussen 10 – 10000 μL/min
Zeer constant debiet nodig in verband met detectie
o Pmax = 40 MPA
o Diverse typen pompen beschikbaar
Twee pompen die onafhankelijk van elkaar werken binair pompsysteem
Nauwkeurige regeling van de twee oplosmiddelfracties
Zeswegkraan nodig duurder
- Injectiesysteem
o Zeswegkraan waarin een zogenaamde monsterlus is opgenomen
o Monsterkraan moet bestand zijn tegen hoge drukken en ‘dode’ ruimten moet
worden vermeden om extra piekverbreding te vermijden.
o Monster wordt hierin meteen vermengd met het oplosmiddel
- Kolom
o Eigenschappen
Roestvast staal
Lengte (L) 5-20 cm
Inwendige diameter 4-5 mm
Invloed verbinding kolom-detector op de uiteindelijke piekvorm
o De dode ruimten bij aansluitingen op de kolom moeten zo klein mogelijk zijn!
- Detector
o Tegenwoordig veelal gekoppeld aan UV-detector
Hoge gevoeligheid
Groot meetbereik
Vrij ongevoelig voor temperatuursveranderingen
o Computer maakt signaal zichtbaar
Wanneer pas je welke techniek toe?
- Vluchtig monster GC mogelijk
- Monster niet vluchtig (HP)LC mogelijk
- Grote moleculen GPC mogelijk
Wanneer HPLC toepassen
- Bij sterk polaire mengsels
- Hoge molecuulmassa’s
- Thermisch instabiele materialen
- Materialen met een neiging tot ionisatie
Formules zie formuleblad
∆ t R, j , i
- Resolutie: R j ,i=
2(σ t ¿ ¿ , j−σ t ,i) ¿
L
Retentietijd: t R , i= ( 1+k i ) =t R , 0 (1+k i)
' '
-
μ
( )
2
tR
- Schotelgetal: N=
σt
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller sachagelissen. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $4.67. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
62890 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now