Summary
Samenvatting Weefsels H1: Histologische technieken
- Course
- Institution
Samenvatting gebaseerd op slides van professor Vral met bijhorende notities van in de les, alles wat je voor de theorie moet kennen van dit onderdeel.
[Show more]
Seller
Follow
beexxx
Content preview
Samenvatting histologischetechnieken
Inhoud
1. Doel....................................................................................................................................................1
2. Problemen..........................................................................................................................................1
3. Methodes...........................................................................................................................................1
3.1 Fixatie...........................................................................................................................................1
3.2 Inbedden......................................................................................................................................2
3.3 Snijden..........................................................................................................................................2
3.4 Kleuren – lichtmicroscopie............................................................................................................3
3.4.1 Helderheid LM.......................................................................................................................3
3.4.2 Zure en basische kleurstoffen................................................................................................3
3.4.3 Andere kleurtechnieken.........................................................................................................4
3.5 Contrasteren – elektronenmicroscopie.........................................................................................5
3.5.1 Werking..................................................................................................................................5
3.5.2 Observatiemethoden.............................................................................................................5
3.5.3 Speciale observatiemethoden...............................................................................................6
1. Doel
- Weefsels + organen observeerbaar maken voor LM of EM
- LM kleur
- EM zwart-wit
2. Problemen
- Weinig contrast in biologisch materiaal kleur nodig
- Weinig licht( = elektronen) doorlatend te dik
3. Methodes
3.1 Fixatie
- Bewaren van weefsel met behoud van oorspronkelijke structuur = denatureren van eiwitten =
3D structuur gaat verloren stilleggen van bacteriële en autolytische afbraakreacties
o Anders zou het weefsel rotten
- Permeabiliseren van celmembraan gaten in membraan maken zodat kleurstof en
chemische fixatie erin kan
o Soms wordt het membraan daardoor vloeibaar
- Maakt weefsel harder + poreuzer
1
, o Nodig zodat je dunnen coupes kunt snijden
- Soorten fixatie
o Chemische fixatie
Immersie = onderdompelen
Perfusie = in bloedvaten spuiten
Alcoholen
Ethanol eiwitten doen neerslaan + ze worden onoplosbaar =
precipiterend fixatief
Glutaaraldehyde, formaldehyde eiwitten gaan crosslinken=
crosslinkende fixatief eiwitten zitten aan elkaar vast dus werking
wordt stilgelegd
Andere: azijnzuur, osmium tetroxide
o Koude fixatie
Invriezen van weefsel
Gaat sneller maar minder dunnen coupes
- Artefacten verandering die tijdens de fixatie ontstaan in een weefsel en dus afwijken van
de in vivo situatie
- Hoe groter het weefsel hoe langer het in het fixatief moet zitten
3.2 Inbedden
- Inbedmiddel
o Substantie die in weefsel dringt
o Moet eerst vloeibaar zijn en dan hard
o Materiaal snijdbaar in dunne coupes
o Bv paraffine/ kaarsvet , hars, plastics
Verharden door polymerisatie
o Zijn hydrofoob eerst weefsel dehydrateren
Breng weefsel telkens in ethanol met stapsgewijs met een stijgende
concentratie: 30° 50° 70° 90°
- Clearing
o Gebeurd in tolueen bindt zowel met ethanol als het inbedmiddel
- Infiltratie weefsel wordt geplaatst in het vloeibaar inbedmiddel
- Inbedden verharden van inbedmiddel in weefsel
- Trimmen wegsnijden van inbedmiddel zodat je mooie coupes kunt maken
3.3 Snijden
- Dankzij hardheid van het inbedmiddel kun je het weefsel in dunne coupes snijden
- Microtoom= apparaat waarmee je de coupes kunt snijden
- Paraffine
o 1-20µm 5µm
o Doorlaatbaar voor licht LM
o Microtoom met stalen mes
- Hars & plastics harder dan paraffine
o 50 nm – 2µm: half dunne coupes
LM
Microtoom met glazen mes
Meer details
o 60- 100 nm 70 nm
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller beexxx. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.26. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
62491 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now