Een biochemische test die antilichamen en enzym-gemedieerde kleurveranderingen gebruikt om de
aanwezigheid van ofwel antigenen (eiwitten, peptiden, hormonen) of antilichamen in een bepaald
monster te detecteren
Hoge gevoeligheid en een sterke specificiteit: gebruikt zeer specifieke antilichaam-antigeenreacties
Biologische moleculen detecteren a.d.h.v. enzym-gelabelde antigenen en antilichamen
1) Antigenen in 96 well-plaat
2) Primair antilichaam (specifiek capture-antilichaam) toevoegen bindt aan het antigeen
3) Secundair antilichaam (enzym-gekoppeld detectie-antilichaam) toevoegen bindt aan primair
antilichaam
4) Chromogene substraten toevoegen geeft zichtbare kleurverandering geeft aanwezigheid
antigeen aan
5) Kleurintensiteit kwantitatief of kwalitatief meten om aanwezige hoeveelheid antigeen te identificeren
Blokkering
Coating/capture Toevoegen
irrelevante eiwitten Probing/detectie Signaalmeting
Immobilisatie
of andere molecule Incubatie met het Detectie signaal via
antilichaam of
om onverzadigde gelabelde antigeen galebelde antigeen
antigeen op
oppervlaktebinding of antilichaam of antilichaam
oppervlak welletjes
splaatsen te
bedekken
1
, Voordelen Nadelen
Snel: gebruikt enkel antilichaam Inflexibel en duur: prim. Antilichaam moet
afzonderlijk gelabeld worden en kan niet voor
Elimineert kruisactiviteit tussen antilichamen
meerdere experimenten gebruikt worden
Signaal is minder versterkt
Meestal gebruikt voor analyse van de immuunrespons op een antigeen
Voordelen Nadelen
Hoge gevoeligheid: prim. antilichaam heeft Kruisreacties met sec. antilichaam mogelijk
verschillende epitopen die gebonden kunnen
Heeft extra incubatiestappen nodig
worden door meerdere sec. antilichamen
signaal versterkt
Flexibel: verschillende prim. detectie-antilichamen
kunnen worden gebruikt met een gelabeld sec.
antilichaam
Veel variaties van gelabelde sec. antilichamen zijn
verkrijgbaar
Meestal gebruikt voor bepaling van de totale antilichaamconcentratie in het monster
Voordelen Nadelen
Zeer hoge gevoeligheid: 2 antilichamen gebruikt Bij elkaar passend paar is vereist: optimalisatie
zodat het antigeen specifiek wordt opgevangen en van antilichaamcombinaties kan moeilijk zijn. Elk
gedetecteerd. Antigeen hoeft voor de meting niet antilichaam moet reageren met een specifiek
te worden gezuiverd epitoop op het doeleiwit en kan niet kruisreageren
met zijn partnerantilichaam
Flexibiliteit: zowel indirecte als directe detectie
mogelijk
Meestal gebruikt voor het analyseren van complexe monsters. We hoeven het antigeen niet te zuiveren
voordat we deze methode gebruiken.
Voordelen Nadelen
Hoge gevoeligheid: kan specifieke antigenen in Vals positief: lage specificiteit
kleine hoeveelheid detecteren
Vereist geen monsterverwerking
Grote precisie, nauwkeurigheid en
reproduceerbaarheid
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller BrentUGent. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.30. You're not tied to anything after your purchase.