Summary
Samenvatting Biomoleculen
- Course
- Institution
Samenvatting Biomoleculen
[Show more]
Seller
Follow
BrentUGent
Reviews received
Content preview
2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia HajnusBiomoleculen: analyse en scheiding
Deel 1: Proteïne-opzuivering
Wat zijn proteïnen ?
Belangrijke aminozuren:
pH < pKa: zijketen geprotoneerd
pH = pKa: helft geprotoneerd, helft gedeprotoneerd
pH > pKa: zijketen gedeprotoneerd
Primaire structuur eiwit: AZ sequentie
Secundaire structuur eiwit: α-helix en β-vouwblad
H-bruggen
Tertiaire structuur eiwit: disulfidebinding, ionische binding, H-bruggen, hydrofobe interacties
Quaternaire structuur eiwit: verschillende peptiden interageren
dimeren, trimeren, tetrameren,…
Posttranslationele modificaties: toevoeging nieuwe functionele groepen
Iso-elektrisch punt (IEP of pI): pH waarbij het proteïne geen netto positieve of negatieve lading heeft
2D-polyacrylamidegelelektroforese
Scheiding op basis van moleculair gewicht en pI
Hydrofobiciteit vs. Hydrofiliciteit: hydrofobe eiwitten aan binnenkant → membranen
1
,2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia Hajnus
Absorptie door een eiwit
Absorberen licht bij 280 nm: tyrosine, tryptofaan en disulfidebruggen
! phenylalanine niet
Totale absorptie hangt af van extinctiecoëfficiënt ε [1/M cm]: wordt groter naarmate meer trp/tyr/S-S
Wet van Lambert-Beer: A = C * ε * L
C: concentratie [M]
L: lengte cuvet [cm]
Proteïne-opzuiveringstechnieken
Oplosbaarheid
Balans geladen, polaire en hydrofobe AZ aan oppervlak eiwit bepaalt oplosbaarheid
In neutrale zoutoplossing of organische solventen: proteïnen precipiteren/neerslaan in een bepaald bereik door
een lage oplosbaarheid
Ruwe manier op te fractioneren in ‘oplosbaarheidsfracties’
Zuiver proteïne verkrijgen onmogelijk doordat de oplosbaarheidsbereiken overlappen
Ammoniumsulfaatprecipitatie
= salting out
Proteïne in bufferoplossing is zeer sterk gehydrateerd: geladen groepen aan oppervlak trekken watermoleculen
aan en binden ze sterk
Toevoeging veel zout: zoutionen trekken watermoleculen weg van proteïne-oppervlakte (doordat ionen een
hogere ladingsdensiteit hebben) proteïne-moleculen gedwongen met elkaar te interageren + aggregeren
Elk proteïne begint te precipiteren vanaf bepaalde zoutconcentratie zonder dat hij denatureert
Pellet: precipitaten collecteren via centrifuge
Supernatans: bevat oplosbare deel
Doel: proteïne-mengsels fractioneren of concentreren
2
, 2022-2023 Biomoleculen: analyse en scheiding Amelia Hajnus
Lading
Verschillende oppervlakteladingen (afkomstig van glu, asp, his, lys, arg) die pH afhankelijk zijn → pI proteïne
Ionuitwisselaars
Ionenuitwisselaars: scheiden negatief geladen (anionen) en positief geladen (kationen) proteïnen volgens
gradiënt
Anionuitwisselaar Kationuitwisselaar
+ geladen hars/resin - geladen hard/resin
Bindt anionen Bindt kationen
Doorloop kationen Doorloop anionen
Elueren = gebonden ionen losmaken d.m.v. zoutoplossing
Eluaat = wat vrijkomt na stijging zoutconcnetratie
NaCl heeft grotere ladingsdensiteit → verdringt gebonden eiwitten → minst sterk gebonden eiwitten elueren
eerst bij laagste c(NaCl)
Elueren kan ook d.m.v. pH-gradiënt
Soorten:
1) Beads in oplossing: discontinue metingen met spectrofotometer
2) Zelf-bereide kolom startende van een slurry: discontinue metingen met spectrofotometer
3) Prepacked kolom: real-time monitoring
4) Chromatografiesystemen
Gradiënt elutie
Chromatogram:
x-as: volume dat over uitwisselaar is gelopen uitgedrukt in kolomvolumes
y-as: blauw = absorptie bij 280 nm als maat voor eiwitten die de kolom passeren
rood = c(NaCl) waarmee geëlueerd wordt
3
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller BrentUGent. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.27. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
81113 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now