Other
Practicum
- Course
- Institution
Practicumverslag Moleculaire Biologie 2. Practicum 1: Signaaltransductie TLR4. Practicum 2: Leptine-Leptinereceptor interactie.
[Show more]
Seller
Followmarievancaenegem
Reviews received
Content preview
Practicum Moleculaire Biologie IIAcedemiejaar 2020-2021
Verslag Practicum I: online BESPREKING RESULTATEN TLR4 signaaltransductie
In te dienen VERSLAG opstellen met deze wordfile als template.
Indienen als wordfile via opdracht in ufora door student met naam 1.
Studenten (alfabetisch aub):
Dit online verslag dient enkel gemaakt te worden door de studenten die dit practicum niet on campus hebben kunnen
uitvoeren.
Studenten die het practicum on campus hebben uitgevoerd hebben reeds een verslag ingediend en dienen voor dit
practicum niets meer in te dienen op ufora.
1. Het resultaat van de Western Blots voor detectie van p65 en p-p65 van deel 1 van het TLR4 practicum is beschikbaar
via Ufora in de Practicum module. Kopieer in het kader hieronder dit resultaat. Voeg extra info bij op de figuur die
relevant is om de figuur volledig te begrijpen.
Bespreek de resultaten. Wat hadden jullie verwacht? Komt het bekomen resultaat overeen met de verwachtingen
op basis van de schematische voorstelling in de practicummota’s? Waarom wel/niet en wat betekent dit (enkel op
basis van dit experiment)? (10 lijntjes)
m: moleculaire gewichtsmerker LPS: lipopolysaccharide MG132: proteasoom-inhibitor
Linkerzijde: geïncubeerd met anti-p65 (herkent alle p65-moleculen)
Rechterzijde: geïncubeerd met anti-fosfo-S536-p65 (herkent enkel gefosforyleerde p65-moleculen)
Verwachtingen voor p65 (linkerdeel van de resultaten): p65 is een gewoon eiwit en verwachten we dus telkens te
detecteren omdat het zeker aanwezig is in de cel, ook al wordt de signaalweg niet geactiveerd.
● Well 1 is niet gestimuleerd dus verwachten we een signaal voor p65 (controle).
● Well 2 is behandeld met LPS dus verwachten we een signaal voor p65.
, Practicum Moleculaire Biologie II
Acedemiejaar 2020-2021
● Well 3 is behandeld met LPS en MG132 dus verwachten we een signaal voor p65.
Verwachtingen voor p-p65 (rechterdeel van de resultaten):
● Well 1 is niet gestimuleerd, waardoor geen signaaldetectie van p-p65 verwacht wordt.
● Well 2 is behandeld met LPS en we verwachten dus wel een signaal voor p-p65.
● Well 3 is behandeld met LPS en MG132 wat zorgt voor inhibitie van proteasoom en we verwachten dan ook
geen signaal van p-p65 te detecteren.
Er blijken toch verschillen te zijn tussen de bekomen resultaten en de verwachtingen. P-p65 (in well 3) wordt nog
steeds gedetecteerd na inhibitie van het proteasoom door MG132. Dit komt doordat IKKβ p-65 zeker fosforyleert, ook
al is het IκB nog niet gedegradeerd door het proteasoom. In well 1 is er ook een zwak signaal voor p-p65 te zien, wat
we in eerste instantie ook niet verwacht hadden.
2. Bespreek de meetresultaten van deel 2 van het TLR4 practicum: bepaling van de hoeveelheid gesecreteerd alkalisch
fosfatase op basis van de vorming paranitrofenolaat. Wat hadden jullie verwacht? Komt het bekomen resultaat
overeen met de verwachtingen? Waarom wel/niet? (6 lijntjes)
Als p65 wordt vrijgesteld en geactiveerd door fosforylatie (p-p65) dan zal het alkalisch fosfatase gen afgeschreven en
geactiveerd worden. Daardoor wordt het toegevoegd substraat para-nitrofenylfosfaat omgezet in para-nitrofenol,
wat zorgt voor een gele kleur bij 405nm.
We verwachten na toevoeging van MG132 geen gele kleur, maar uit de resultaten blijkt dat niet alle proteasomen
geïnhibeerd worden waardoor er nog een deel van de p65 wordt gefosforyleerd en nog steeds transcriptie en
translatie optreedt van het gen. Er wordt dus een ook een lichtgele kleur gedetecteerd.
3. Leg de resultaten van deel 1 en deel 2 samen. Beide resultaten zijn samen in overeenkomst met de processen die
doorgaan in de cellen.
Geven beide experimenten dezelfde informatie weer? Leg uit
Welk resultaat is de beste reflectie van de activatie van de signaalbaan? Leg kort uit. (5 lijntjes)
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller marievancaenegem. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $5.92. You're not tied to anything after your purchase.
Can Stuvia be trusted?
4.6 stars on Google & Trustpilot (+1000 reviews)
73918 documents were sold in the last 30 days
Founded in 2010, the go-to place to buy study notes for 14 years now