verslag toegepaste biochemie: enzym kinetiek van bacterieel a-amylase
176 views 6 purchases
Course
Toegepaste biochemie
Institution
Hogeschool Utrecht (HU)
Dit bestand bevat:
- de uitvoering en verslag legging van vaardigheid 3 en 4 (enzym kinetiek) van toegepaste biochemie
- verslag enzym kinetiek van bacterieel a-amylase.
voor dit verslag is een 7,5 behaald.
Het doel van het experiment is het pH optimum berekenen en de enzymactiviteit van α-
amylase bepalen bij verschillende substraat concentraties.
Het enzym a-amylase is een hydrolase enzym die aanwezig is in onder anderen humaan
speeksel, dit enzym heeft als taak: zetmeel doormiddel van hydrolyse in korte stukjes
“knippen”. Dit enzym komt echter ook bacterieel voor. In dit onderzoek is ervoor gekozen om
met bacterieel a-amylase te werken, er is voor de bacteriële variant gekozen vanwege
Covid-19 maatregelen.
De opzet van dit onderzoek bestaat uit het maken van verscheidene oplossingen met een
wisselende substraat concentraties. Door middel van het bacterieel enzym α-amylase wordt
de omzetting van het substraat in werking gezet. Na enkele minuten wordt de reactie
beëindigd door een HCl oplossing. Door gebruik te maken van een blauw complex dat
gevormd wordt door toevoeging van een jodide oplossing kan er worden gekeken hoeveel
omzetting er heeft plaats gevonden wanneer er gebruik gemaakt wordt van een UV-VIS
analyse.
Dit wordt bepaald met behulp van de Michaelis Menten kinetiek en een lineweaver burkplot.
In deze grafieken kan de Vmax en de km worden bepaald.
Naar verwachting ligt het pH optimum van het bacterieel enzym α-amylase rond de pH 7,
bedragen de Michaelis-Menten parameters een positief getal en wordt het zetmeel door het
enzym omgezet.
, VCHC-09 en VCHC-07
Toegepaste biochemie: ”Enzymkinetiek”
SAMENVATTING
Het doel van het experiment is het pH optimum berekenen en de enzymactiviteit van
bacterieel α-amylase bepalen, bij verschillende substraat concentraties, en het bepalen van
de Michaelis-Menten parameters km en Vmax. Dit wordt via een UV-VIS geanalyseerd.
In dit experiment zijn er verschillende oplossingen gemaakt die andere concentraties
bedragen. Aan de hand van de gemeten absorptie van een UV-VIS analyse, kan er een
Michaelis-Menten plot en een Lineweaver Burk plot worden gemaakt. Beide methoden
worden gebruikt voor de analyse van dit experiment.
Uit dagdeel één, figuur 2, blijkt dat het pH optimum zich rond de pH 6 bevindt.
Bij het tweede deel van het experiment zijn de extincties gemeten van de enzymactiviteit na
3 minuten. Hieruit kwamen de waardes voor de Vmax en Km naar voren. Deze bedragen
voor Km 10,6 en voor Vmax 0,055 ΔA/min volgens de Michaelis-Menten plot.
Gekeken naar de Lineweaver Burk plot kan de Km en de Vmax nauwkeuriger worden
benaderd. Hierin komt naar voren dat de km -174,89 mM bedraagt, en de Vmax -0,3211
mM/s.
Echter zijn dit onaannemelijke waarden die niet aan de verwachting voldoen. Daarom wordt
dit onderzoek als niet betrouwbaar gesteld. Er wordt aangeraden om dit onderzoek te
vervolgen, en de metingen in triplo uit te voeren om zo eventuele onwaarschijnlijkheden en
uitbijters uit te sluiten.
SUMMARY
The goal of this experiment is to calculate the pH optimum and to determine the enzyme
activity of bacterial α-amylase, at different substrate concentrations and to determine the
Michaelis-Menten parameters km and Vmax.
This is analysed through UV-VIS. In this experiment, different solutions and concentrations
have been made. Based on the measured absorbance from a UV-VIS analysis, a Michaelis-
Menten plot and a lineweaver Burk plot can be made. Both methods are used for the
analysis of this experiment.
Day one, figure 2, shows that the pH optimum is at a pH of 6. In the second part of this
experiment, the absorbances of the enzyme activity were measured after 3 minutes. This
resulted in the values for Vmax and km. The values are: Km 10,6 mM and Vmax 0,055
ΔA/min according to the Michaelis-Menten plot.
Looking at the lineweaver Burk plot, the km and Vmax can be approximated more accurately.
This shows that the km is -174,89 mM, and the Vmax is -0,3211 mM/s.
However, these are implausible values that do not meet the expectations. Therefore, this
study is considered to be unreliable. It is recommended to continue this study and to perform
the measurements in triplicate in order to rule out any improbabilities and outliers.
PRINCIPE
2
The benefits of buying summaries with Stuvia:
Guaranteed quality through customer reviews
Stuvia customers have reviewed more than 700,000 summaries. This how you know that you are buying the best documents.
Quick and easy check-out
You can quickly pay through credit card or Stuvia-credit for the summaries. There is no membership needed.
Focus on what matters
Your fellow students write the study notes themselves, which is why the documents are always reliable and up-to-date. This ensures you quickly get to the core!
Frequently asked questions
What do I get when I buy this document?
You get a PDF, available immediately after your purchase. The purchased document is accessible anytime, anywhere and indefinitely through your profile.
Satisfaction guarantee: how does it work?
Our satisfaction guarantee ensures that you always find a study document that suits you well. You fill out a form, and our customer service team takes care of the rest.
Who am I buying these notes from?
Stuvia is a marketplace, so you are not buying this document from us, but from seller ReneeTessa. Stuvia facilitates payment to the seller.
Will I be stuck with a subscription?
No, you only buy these notes for $3.79. You're not tied to anything after your purchase.
