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Sumario Extracción de ácido nucleicos y enzimas de restricción
RESUMEN DE LA Extracción de ácido nucleicos y enzimas de restricción
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Extracción de ácido nucleicos.Elección del método de extracción:
• Primero, saber el tipo de ácido nucleico que se va a extraer: ADN de cadena
sencilla, ARN total, ARNm o ARNr.
• Organismo de origen del ácido nucleico: mamíferos, plantas, procariotes o virus.
• Fuente del ácido nucleico: cultivo celular, tejido generalmente biopsia, sangre,
orina, líquido cefalorraquídeo, etc.
• Técnica en la que se utilizará el ácido nucleico extraído: según el uso que vaya a
tener el ácido nucleico los requerimientos de rendimiento, pureza y tiempo de
extracción variarán de acuerdo al método que se vaya a utilizar.
El ADN genómico suele extraerse para utilizarlo en procesos como una PCR
cualitativa, para diagnóstico, determinación de variantes alélicas o clonación en
vectores. En cambio, el ARN se extrae para realizar una reacción de
retrotranscripción y, posteriormente, una PCR que determine los niveles de
expresión génica en condiciones y momentos determinados.
Extracción de DNA.
Incluye procesamientos químicos y físicos
Extracción de ADN por técnica fenol-cloroformo: Técnica fundamentada en
la lisis total de las células y sus estructuras subcelulares mediante el empleo
de detergentes y una posterior eliminación eliminación de las proteínas
mediante su extracción, como también de los componentes lipídicos con
solventes orgánicos. Esto deja al ADN puro listo para su separación por
precipitación en soluciones alcohólicas. La más utilizada
Técnica de salting OUT: La principal diferencia en esta metodología a la de
fenol-cloroformo, radica en el empleo de una solución concentrada de sales
en lugar de solventes orgánicos para la lisis celular y la extracción de
proteínas. La adición de la solución saturada de sales provoca la agregación
de proteínas y debris celular, lo que permite la separación de los ácidos
nucleicos. Generalmente, estas soluciones se preparan a saturación con
NaCl. Una centrifugación posterior a la adición de la solución concentrada
de sales precipita el debris y las proteínas, y deja libre el ADN en el líquido
del sobrenadante, que se traspasa a un nuevo tubo para su lavado y
precipitado.
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