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Sumario Resumen Unidad 2 Acidos Nucleicos y sus enzimas asociadas, Biología molecular y citogenética

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Grado
Laboratorio clínico y biomédico

Institución
Laboratorio Clínico Y Biomédico

Resumen de la Unidad 2 del Modulo Biología Molecular y citogenética del primer año del grado de Laboratorio Clínico y Biomédico

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¿Qué capítulos están resumidos? Tema2
Subido en 1 de octubre de 2022
Número de páginas 8
Escrito en 2021/2022
Tipo Resumen

replicación del adn
traducción del arnm
estructura y composición quimica de los acidos nucleicos
organización de las molecula de adn
estructura tipos y organización del arn
transcripción de adn a arn

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1. EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN: PRIMERA ETAPA

Los ácidos nucleicos se encuentran en el núcleo celular, en el seno del citoplasma o en mitocondrias o
cloroplastos.
Las membranas celulares limitan la célula y además le permite a la célula tener relación con el medio exterior.
Las membranas y paredes constituyen una verdadera barrera que se deberá vencer para obtener ADN.
Con la extracción, conseguimos hacer accesibles a los ácidos nucleicos a los reactivos y enzimas que se emplean
en las diversas técnicas; Con la purificación, eliminamos las sustancia y elementos que pueden interferir en ellas.

2. PRETRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS BIOLÓGICAS

SANGRE

Muestra biológica más habitual, se purifica a partir de los leucocitos. Muchos de sus componentes sanguíneos
interfieren en técnicas moleculares como el grupo hemo de la hemoglobina (Potente inhibidor de la PCR), por
eso, se elimina mediante la lisis de los hematíes.

Consideraciones sobre la obtención y conservación de la muestra:
• La obtención de los ác. Nucleicos es a partir de sangre total anticoagulada con EDTA.
• Es conveniente realizar la extracción de ác. Nucleicos en las 24 horas siguientes a la obtención de la
muestra.
Lisis de los hematíes:
1) Lisis de los hematíes: Se rompe los hematíes con una solución o tampón.
2) Centrifugado de la muestra: Se obtiene un sedimento o pellet y un sobrenadante.
3) Eliminación del sobrenadante: Se eliminan los componentes del plasma sanguíneo y la hemoglobina,
que se libera por la rotura de los hematíes.
4) Conservación del sedimento: En el sedimento habrá quedado los leucocitos.
Este pretratamiento también es válido para muestras de médula ósea.

Obtención de células mononucleadas de sangre periférica:
• La sangre se puede utilizar también como material de partida para detectar, aislar y estudiar ácidos
nucleicos de algunos retrovirus que infectan linfocitos. En estos casos, nos interesa aislar las “células
mononucleadas de sangre periférica” o “PBMC” (Peripheral Blood mononuclear cell), es decir, monocitos y
linfocitos, antes de extraer los ác. Nucleicos. Se consigue mediante una centrifugación en gradiente de
densidad:
1) Colocación del medio de separación: Se coloca en un
tubo el medio de separación y encima, la sangre (
método A) o, en un tubo con sangre, se añade por
encima el medio de separación (método B)
2) Centrifugación: Se centrifuga durante 20-30 min
a. Durante la centrifugación, el componente del
medio de separación, causa agregación de los
hematíes facilitando su rápida sedimentación.
b. Las células mononucleadas tienen una densidad
menor que el medio de separación y permanecen
en la interfase entre este y el plasma
3) Eliminación del plasma sobrenadante
4) Aspiración con pipeta la capa de células mononucleadas o PBMC: Se transfiere a un tubo limpio y se
lava con tampón o solución salina para eliminar restos de plasma y plaquetas.
5) A partir de las células lavadas se puede continuar con el proceso de extracción de ácidos nucleicos.

, CULTIVOS CELULARES
Sus métodos de obtención son con células in vitro mediante siembras controladas en medios adecuados.
El pretratamiento de estas muestras consiste en la recolección de las células antes de seguir con la
extracción de los ácidos nucleicos.
TEJIDOS ANIMALES O VEGETALES FRESCOS
La obtención de ácidos nucleicos requiere un pretratamiento previo de homogeneización: Tratamiento
mecánico o químico al que se somete un tejido para liberar las células que lo integran:
• Homogeneización mecánica: Someter al tejido a una acción trituradora o abrasiva para desmenuzarlo.
▪ Homogeneización mecánica automatizada: Mediante agentes abrasivos y agitación con esferas.
▪ Homogeneización mecánica manual: Mediante el uso de morteros.
• Homogeneización química: Somete a un tejido a la acción de proteasas y detergentes que degradan
los componentes tisulares, disgregando las células.
TEJIDOS FIJADOS EN FORMOL E INCLUIDOS EN PARAFINA.(FFPE)
Los tejidos son materiales muy útiles para la realización de estudios retrospectivos.
La calidad de los ácidos nucleicos recuperados suele ser peor que la de aquellos purificados a partir de
tejidos frescos.
• Esta pérdida de calidad se produce porque durante el proceso de fijación, el ADN se fragmenta y el ARN
puede ser parcialmente degradado, dependiendo del tiempo transcurrido entre la obtención y la fijación de
la muestra.
Desparafinización: Eliminación de la parafina de los tejidos FFPE
1) Con un microtomo, se obtiene cortes finos del tejido.
2) Se transfieren estos cortes a un tubo eppendorf
3) Se incuba secuencialmente con Xilol u otro agente desparafinante.
4) Finalmente, se somete a una homogeneización química.
OTRAS MUESTRAS
Cultivos de bacterias y levaduras: Su pretratamiento consiste en situar las bacterias y levaduras
en un tampón de suspensión.
Células de la mucosa oral: Existen diversos sistemas:
• Mediante raspado de la mucosa oral con torunda o cepillo.
• Mediante enjuague con una solución conservante.
• Recolectando directamente.
Esputo: Para detectar o confirmar la presencia de microorganismos patógenos causantes de infecciones
respiratorias. Su pretratamiento consiste en la fluidificación con un agente mucolítico.

3. EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

La extracción de los ácidos nucleicos implica dos procesos:

• La lisis celular para liberar los ácidos nucleicos
• La inactivación de nucleasas celulares (ADNasas y ARNasas) para evitar la degradación de los ácidos
nucleicos.

Ambos procesos se consiguen mediante la incubación de la suspensión celular con una solución de lisis. En células
con pared (bacterias, levaduras y hongos), será necesario aplicar algunas variaciones a este proceso de extracción

El proceso de extracción consiste en la obtención de un lisado celular de aspecto homogéneo en el que los
ácidos nucleicos se encuentran libres de la estructuras celulares en las que se mantenían aislados.

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