NF7 INMUNOHISTOQUÍMICA
¿En qué consiste? En la detección de antígenos in situ
Antígeno: Sustancia extraña introducida en un organismo, produce respuesta inmune
estimulando la producción de Ac
¿Qué parte del antígeno nos interesa?
Interesa el epítopo o determinante antigénico que es parte del antígeno que reconoce y
estimula la producción de Ac. → Ac son específicos a un epítopo y no al antígeno entero.
Los Ac siempre diferencian al 100% todos los antígenos?
Depende de la especificidad → capacidad del Ac para diferenciar Ag de estructura similar.
Esto depende de la región Fab del Ac
Entonces pueden reaccionar un Ac con un Ag que no toca?
Sí, esto es la reacción cruzada y es la unión de un Ac con un Ag parecido estructuralmente
Ac y Ag son inseparables?
No, ya que depende de la fuerza o intensidad de unión entre ellos llamada afinidad
Entonces esta técnica casi siempre acierta en lo que buscamos?
Depende de la sensibilidad de la técnica. Esto depende de la cantidad mínima de antígeno
que se puede detectar con el método o técnica. Inmunoglobulina y anticuerpo: son
sinónimos.
1.ANTICUERPO
- Ig =Ac = glucoproteínas sintetizadas por linfocito B
- 4 cadenas polipeptídicas
2.ANTISUEROS
Formados por plasma con anticuerpos, encontramos:
- Policlonales: Mezcla de Ig que responden a diferentes epítopos de un mismo antígeno.
Obtenidos al inyectar Ag a un animal de una especie diferente → Se consigue Ig
producidas por diferentes clones de linfocitos.
- Monoclonales: Todos los Ac reaccionan al mismo epítopo porque provienen del mismo
linfocito B. Se consiguen al fusionar células de linfocito B con mielomas, obteniendo
hibridomas.
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, ANTISUEROS
POLICLONALES
Mezcla de Ig que responden a diferentes epítopos de un mismo antígeno. Obtenidos al inyectar Ag a un
animal de una especie diferente → Se consigue Ig producidas por diferentes clones de linfocitos.
Ventajas - Reconocen varios epítopos → más probabilidad que dé marcaje.
- Producción más económica.
Desventajas - Diferente afinidad entre lotes
- Suele tener más reactividad inespecífica al reconocer varios epítopos.
MONOCLONALES
Todos los Ac reaccionan al mismo epítopo porque provienen del mismo linfocito B. Se consiguen al
fusionar células de linfocito B con mielomas, obteniendo hibridomas.
Ventajas - Reconocen un único epítopo → menos marcaje inespecífico. Aplicado al mismo Ag de
especie distinta puede perder inmunoreactividad por pequeñas diferencias.
- Afinidad muy parecida entre lotes.
- Fuente ilimitada de Ac con especificidad concreta.
Desventajas - Más fácil obtener un falso negativo.
- Producción cara y laboriosa.
El antisuero ideal:
- Alta especificidad al Ag de interés
- Alta afinidad
- Elevada concentración (=titulación). Esto permite diluirlo más veces y ser usado más
veces → ahorro €/$.
Conservación del antisuero
- Dividir un mismo antisuero en alícuotas sin diluir o diluidas (normalmente 1/10, en función
de la dilución de uso).
- Conservar una alícuota a 4°C (no es recomendable varios días, ayuda añadir
seroalbúmina bovína (BSA) para evitar que se enganche al tubo y agente citoestático
(evita crecimiento microorg.)) y el resto a -20 °C. Es interesante no congelar todo y
confirmar que afecta inmunoreactividad.
- Otra opción es a -20°C diluido en glicerol que evita la congelación.
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¿En qué consiste? En la detección de antígenos in situ
Antígeno: Sustancia extraña introducida en un organismo, produce respuesta inmune
estimulando la producción de Ac
¿Qué parte del antígeno nos interesa?
Interesa el epítopo o determinante antigénico que es parte del antígeno que reconoce y
estimula la producción de Ac. → Ac son específicos a un epítopo y no al antígeno entero.
Los Ac siempre diferencian al 100% todos los antígenos?
Depende de la especificidad → capacidad del Ac para diferenciar Ag de estructura similar.
Esto depende de la región Fab del Ac
Entonces pueden reaccionar un Ac con un Ag que no toca?
Sí, esto es la reacción cruzada y es la unión de un Ac con un Ag parecido estructuralmente
Ac y Ag son inseparables?
No, ya que depende de la fuerza o intensidad de unión entre ellos llamada afinidad
Entonces esta técnica casi siempre acierta en lo que buscamos?
Depende de la sensibilidad de la técnica. Esto depende de la cantidad mínima de antígeno
que se puede detectar con el método o técnica. Inmunoglobulina y anticuerpo: son
sinónimos.
1.ANTICUERPO
- Ig =Ac = glucoproteínas sintetizadas por linfocito B
- 4 cadenas polipeptídicas
2.ANTISUEROS
Formados por plasma con anticuerpos, encontramos:
- Policlonales: Mezcla de Ig que responden a diferentes epítopos de un mismo antígeno.
Obtenidos al inyectar Ag a un animal de una especie diferente → Se consigue Ig
producidas por diferentes clones de linfocitos.
- Monoclonales: Todos los Ac reaccionan al mismo epítopo porque provienen del mismo
linfocito B. Se consiguen al fusionar células de linfocito B con mielomas, obteniendo
hibridomas.
1
, ANTISUEROS
POLICLONALES
Mezcla de Ig que responden a diferentes epítopos de un mismo antígeno. Obtenidos al inyectar Ag a un
animal de una especie diferente → Se consigue Ig producidas por diferentes clones de linfocitos.
Ventajas - Reconocen varios epítopos → más probabilidad que dé marcaje.
- Producción más económica.
Desventajas - Diferente afinidad entre lotes
- Suele tener más reactividad inespecífica al reconocer varios epítopos.
MONOCLONALES
Todos los Ac reaccionan al mismo epítopo porque provienen del mismo linfocito B. Se consiguen al
fusionar células de linfocito B con mielomas, obteniendo hibridomas.
Ventajas - Reconocen un único epítopo → menos marcaje inespecífico. Aplicado al mismo Ag de
especie distinta puede perder inmunoreactividad por pequeñas diferencias.
- Afinidad muy parecida entre lotes.
- Fuente ilimitada de Ac con especificidad concreta.
Desventajas - Más fácil obtener un falso negativo.
- Producción cara y laboriosa.
El antisuero ideal:
- Alta especificidad al Ag de interés
- Alta afinidad
- Elevada concentración (=titulación). Esto permite diluirlo más veces y ser usado más
veces → ahorro €/$.
Conservación del antisuero
- Dividir un mismo antisuero en alícuotas sin diluir o diluidas (normalmente 1/10, en función
de la dilución de uso).
- Conservar una alícuota a 4°C (no es recomendable varios días, ayuda añadir
seroalbúmina bovína (BSA) para evitar que se enganche al tubo y agente citoestático
(evita crecimiento microorg.)) y el resto a -20 °C. Es interesante no congelar todo y
confirmar que afecta inmunoreactividad.
- Otra opción es a -20°C diluido en glicerol que evita la congelación.
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