ACTUALIZACIÓN BIOTECNOLOGÍA
ADN Recombinante
● Inserto
○ Gen que quiero clonar
● ADN Recombinante = Inserto + Vector
● Tecnología de ADN recombinante
○ En este tipo de tecnología necesitaremos
■ Inserto
■ Vector de clonación
■ Enzimas de restricción
■ Enzimas ADN ligasa
■ Células hospedadoras
Enzimas de restricción
● Se trata de endonucleasas que rompen los enlaces fosfodiéster de los nucleótidos
● Son capaces de reconocer secuencias concretas del ADN que contienen entre 4/8
nucleótidos
● Cortan en lugares denominados sitios de restricción
● Normalmente las enzimas de restricción son distintas y por tanto las producen
bacterias diferentes
● Las secuencias reconocidas por las endonucleasas son palindrómicas, es decir, se
leen igual de derecha a izquierda que de izquierda a derecha
● Los extremos resultantes del corte con endonucleasas puedes ser
○ Romos
■ El corte es justo en el centro de simetría de la secuencia
○ Cohesivos / Pegajosos
■ El corte se realiza de manera escalonada quedando extremos pegajosos
Vectores de clonación
● Características
○ Todos los vectores de clonación deben contener
■ Origen de replicación
● Deben replicarse de manera independiente a la célula huésped
■ Genes marcadores
● Permiten conocer el inserto
■ Sitio de restricción
● Para que actúen las endonucleasas
, ● Tipos de vectores de clonación
○ Plásmidos
■ ADN circular extracromosómico al que se le pueden añadir genes de
resistencia a antibióticos y que en el laboratorio se introducen en las
bacterias por electroporación o por transformación
○ Bacteriofago
■ Se usan cuando el ADN que se quiere introducir es mayor del que
puede portar un plásmido
■ Las ventajas frente a los plásmidos son:
● Más eficientes penetrando en las células
● Permiten mayor cantidad de ADN
○ Cósmidos
■ Vectores sintéticos que suman las ventajas de los plásmidos y las de
los fagos
● Solo se usa un fago
○ Fago λ
○ Cromosomas artificiales (YACs)
■ Permiten clonar grandes segmentos de ADN eucariota ya que los
YACs son cromosomas artificiales de levaduras
Células hospedadoras
● Son aquellas en las que se introduce el ADN recombinante
● Entre sus características están las siguientes:
○ Crecimiento rápido
○ No ser patógenas
○ Favorecer la entrada de ADN foráneo
Principales aplicaciones del ADN recombinante
● Introducir ADN en microorganismo y obtener proteínas
○ Hormonas, anticuerpos, antígenos…
● Elaborar genotecas
○ Biblioteca de genes
● Producir organismo transgénicos
Técnicas de separación del ADN
● Electroforesis
○ Permite separar moléculas en función de su movilidad habiendo sido
sometidas a un campo eléctrico
○ Partes
■ El soporte en el que se alisan es un gel de agarosa o poliacrilamida
■ Para visualizar el ADN se utiliza bromuro de etidio
■ Se usa una luz ultravioleta para iluminarlo
ADN Recombinante
● Inserto
○ Gen que quiero clonar
● ADN Recombinante = Inserto + Vector
● Tecnología de ADN recombinante
○ En este tipo de tecnología necesitaremos
■ Inserto
■ Vector de clonación
■ Enzimas de restricción
■ Enzimas ADN ligasa
■ Células hospedadoras
Enzimas de restricción
● Se trata de endonucleasas que rompen los enlaces fosfodiéster de los nucleótidos
● Son capaces de reconocer secuencias concretas del ADN que contienen entre 4/8
nucleótidos
● Cortan en lugares denominados sitios de restricción
● Normalmente las enzimas de restricción son distintas y por tanto las producen
bacterias diferentes
● Las secuencias reconocidas por las endonucleasas son palindrómicas, es decir, se
leen igual de derecha a izquierda que de izquierda a derecha
● Los extremos resultantes del corte con endonucleasas puedes ser
○ Romos
■ El corte es justo en el centro de simetría de la secuencia
○ Cohesivos / Pegajosos
■ El corte se realiza de manera escalonada quedando extremos pegajosos
Vectores de clonación
● Características
○ Todos los vectores de clonación deben contener
■ Origen de replicación
● Deben replicarse de manera independiente a la célula huésped
■ Genes marcadores
● Permiten conocer el inserto
■ Sitio de restricción
● Para que actúen las endonucleasas
, ● Tipos de vectores de clonación
○ Plásmidos
■ ADN circular extracromosómico al que se le pueden añadir genes de
resistencia a antibióticos y que en el laboratorio se introducen en las
bacterias por electroporación o por transformación
○ Bacteriofago
■ Se usan cuando el ADN que se quiere introducir es mayor del que
puede portar un plásmido
■ Las ventajas frente a los plásmidos son:
● Más eficientes penetrando en las células
● Permiten mayor cantidad de ADN
○ Cósmidos
■ Vectores sintéticos que suman las ventajas de los plásmidos y las de
los fagos
● Solo se usa un fago
○ Fago λ
○ Cromosomas artificiales (YACs)
■ Permiten clonar grandes segmentos de ADN eucariota ya que los
YACs son cromosomas artificiales de levaduras
Células hospedadoras
● Son aquellas en las que se introduce el ADN recombinante
● Entre sus características están las siguientes:
○ Crecimiento rápido
○ No ser patógenas
○ Favorecer la entrada de ADN foráneo
Principales aplicaciones del ADN recombinante
● Introducir ADN en microorganismo y obtener proteínas
○ Hormonas, anticuerpos, antígenos…
● Elaborar genotecas
○ Biblioteca de genes
● Producir organismo transgénicos
Técnicas de separación del ADN
● Electroforesis
○ Permite separar moléculas en función de su movilidad habiendo sido
sometidas a un campo eléctrico
○ Partes
■ El soporte en el que se alisan es un gel de agarosa o poliacrilamida
■ Para visualizar el ADN se utiliza bromuro de etidio
■ Se usa una luz ultravioleta para iluminarlo
