Gastcollege IVF: laboratory aspects of in-vitro
Laboratory aspects
In petrischaal: zaadcellen en eicellen voorbereiden, dan samenvoegen en terugplaatsen
- IUI: alleen zaadcellen voorbereiden
- IVF: eicellen ook voorbereid
- ICSI: 1 zaadcel in eicel geïnjecteerd
De zaadcel
1. Zaadcel analyse voor diagnose te stellen
Concentratie bepalen a.d.h.v. telkamer: zaadcellen worden geïmmobiliseerd
- 15 miljoen/ml of minstens dan 39 miljoen per ejaculatie
- Indien minder: oligozospermia
Bewegelijkheid: 4 typen
1. Snel progressief beweeglijk: > 25 μm/s
2. Traag progressief beweeglijk: 5-25 μm/s
3. Niet-progressief beweeglijk: < 5 μm/s, bewegen wel maar gaan niet vooruit
4. Onbeweeglijk: 0 μm/s
Goede staal:
- > 32% progressieve spermacellen of > 40% totale motiele spermacellen
o Indien minder: asthenozo-spermia
- Onbeweeglijk: zijn ze vitaal of niet? Kijken via vitaliteitstest
o Kleurstof toevoegen. Als membraan kapot is gaat zaadcel kleur opnemen
o Als zaadcel kleur niet opneemt leven ze nog, dan kunnen ze nog gebruikt worden
- Categene-syndroom: afwijking staart waardoor tubuli niet schuiven & beweging niet
doorkomt
o = levende zaadcellen maar bewegen niet ICSI
- Necrozo-spermia: er zijn wel spermacellen maar ze zijn allemaal dood MESA of TESA
Mature spermatozoa: vorm
- Mooie ovale kop met DNA
- Rond kop: acrosoom met enzymen die nodig zijn om eicel te doorbreken
- In middenstuk zitten de mitochondria, beweging adhv staart
- In humaan: 4% normale vorm = normaal! < 4% = teratozo-spermia
o Kop: te groot, te langwerpig, puntvormig, vastgebonden aan middenstuk, geen of
minder acrosoom. Middenstuk: dubbel, geen mitochondriën. Staart: gekruld, …..
- In teelbal is spermacel al volledig matuur
o Er is vaak nog cytoplasma van de voorlopercel dat vasthangt aan het middenstuk
o Deze wordt verwijdert als de zaadcel in epididymis komt: laatste stap van maturatie
Immunologische afwijkingen van de spermacellen:
- Gevormde zaadcellen zijn goed beschermd in teelbal door bloed-testiculaire barrière
- Immuunsysteem weet niet van deze antigenenproductie
- Bij bv. trauma: bloed-testis barrière beschadigd bloed in contact met zaadcellen
- Immuunsysteem reageert en lichaam vormt antilichamen tegen eigen zaadcellen
o Sperma-antistoffen kunnen op kop binden: bevruchting benadeeld
o Op middenstuk of staart: beweeglijkheid benadeeld
- volgens hoeveelheid antistoffen: samenklitten van zaadcellen
, Mar-test: Latex partikels gecoat met EGG en EGA binden op spermacel, hier zitten de antilichamen
Roundcells:
- Cellen tussen zaadcellen, zijn groter dan zaadcel zelf
- Kunnen immature spermacellen zijn, of leukocyten zijn:
- Vaststellen a.d.h.v. kleuringstest met benzidine/phloxine B
o Neutrofielen met peroxidase enzymen kunnen beweeglijkheid zaadcel benadelen
o > 1M roundcells in staal: differentiatie uitvoeren om te zien of het neutrofielen zijn
2. Staal voorbereiden
1. Zoals in vivo seminal plasma verwijderen door te wassen
o Heeft decapaciterende factoren: blokkeren zaadcellen om eicellen te bevruchten
o Zo is spermacel pas klaar tegen dat die de eicel moet bevruchten
2. Beweeglijke spermacellen met goede vorm scheiden van rest (vrij van debris)
Gradiënt centrifugatie: oplossing met 2 versch concentraties op elkaar gradiënt
o Daarop semenstaal: bij centrifugeren na 15 min beste deel onderaan
o Selectie op basis van beweeglijkheid én vorm
- Swim-up: semenstaal onder oplosmedium laten staan
o Goed beweeglijke sperma kan opzwemmen naar opl. erboven die gebruiken
o Minder recuperatie + enkel beweeglijkheid, geen vorm
Criteria:
- Therapie gebaseerd op de staal ná voorbereiding!
o Ookal lage concentraties in totaal, misschien heel veel goede vorm en beweeglijkheid
- IUI: >= 2M progressieve, motiele spermacellen
- IVF: > 0,5M progressieve, motiele spermacellen
- ICSI: >= 1 viabele spermacel
Afwijkingen:
- Oligospermi: < 15M/ml concentratie
- Asthenozospermi: <32% progressief motiel
- Teratozospermi: < 4% normale vorm
- Azoospermi: geen enkele aanwezig in ejaculaat
o Secretoir: probleem in spermatogenese
o Excretoir: blokkade in epididymis of vas deferens
3. Zaadcel verkrijgingstechnieken
- Normaal door masturbatie. Indien hier geen levende spermacellen in zitten:
- MESA:
o Microchirurgical epididymal sperm aspiration
o Vocht wordt direct uit epididymis gezogen (bijna niet meer gebruikt)
- TESE:
o Testicular sperm extraction via testis biopsy
o Incissie in teelbal op 3 niveaus, tubuli die eruit komen eruit knippen
o Tubuli uit elkaar getrokken, gemolken zaadcellen gebruikt voor micro-manipulatie
4. Sperma DNA fragmentatie test of DNA-breuken test
- Grootste reden van onvruchtbaarheid mens is foute sperma-functie mislukte fertilisatie
- Dan maar IVF, als dat niet werkt, ICSI = bypass van natuurlijke selectie
- In natuur: bijdrage tot gezond kind: 70-80% van eicel, 10-15% van zaadcel
o Abnormaliteit zaadcel zaadcel veel grotere invloed op embryo en innesteling
- Fertilisatie dus bereikt in vitro met sperma dat nooit had kunnen gebruikt geweest in vivo
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Bi0med. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.