Resume
samenvatting hoofdstuk 2 toolbox biotechnologie
- Cours
- Biotechnologie
- Établissement
- Erasmushogeschool Brussel (EhB)
het 2e hoofdstuk van het gedeelte toolbox samengevat
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Toolbox biotechnologie: Hoofdstuk 2Gelelektroforese
Horizontale elektroforese
DNA scheiding
Gel = agarose
Nancy, Redsafe (vroeger ethidiumbromide) of Diamond bindt specifiek aan DNA voor visualisatie
Verticale elektroforese
Eiwitscheiding
Gel = polyacrylamide
Coomassie blauw bindt aspecifiek aan EW
Stappenplan: methode en principe
Aanmaak buffer
Aanmaak agarose gel
Laden gel
Elektroforese
DNA visualisatie
Aanmaak buffer
TBE of TAE = heeft 2-voudige beschermende functie
Bestaat uit:
Tris (base)
Zorgt ervoor dat pH behouden blijft en beschermd DNA tegen hydrolyse
Boorzuur of Acetaat (zuur)
EDTA (ethyleendiaminetetra-azijnzuur) → blokkeert werking van DNase
Deze buffer word gebruikt voor de aanmaak van de agarose gel
Aanmaak agarose
Agarose = extract van zeewier
moleculaire zeef = kleinere molecule DNA zullen sneller doorheen gel bewegen dan grotere
1g agar (poeder) per 100 ml TBE (buffer) = 1% gel
Agarosepercentages kunnen variëren van 0.3% agarose tot 4%
Hoe kleiner het agarosepercentage hoe groter de te scheiden DNA grootte
Poeder + buffer mengen en opwarmen tot kookpunt, daarna fluorescente dye toevoegen (Nancy)
Handwarme oplossing uitgieten in mal + slotkam toevoegen die na uitharden verwijdert word
Laden gel
Gel overbrengen in elektroforese toestel en aanvullen met TBE buffer tot gel volledig onder staat
DNA stalen pipetteren in de slotjes = laden van de gel
Laadbuffer/ loading dye word toegevoegd aan het DNA voor 2 redenen:
Bevat kleurstof: om pipetteerproces en elektroforese makkelijker visueel te volgen
bevat glycerol: maakt DNA oplossing zwaarder zodat deze makkelijk uitzakt in de slotjes
(densiteit van DNA oplossing wordt verhoogd)
Elektroforese
40 tot 60 minuten op 70 – 100V
Elektrisch veld ontstaat: - geladen DNA moleculen kunnen migreren richting positieve electrode
DNA is negatief geladen en migreert van de kathode (-) naar de anode (+)
Elektrocutiegevaar
De afstand van migratie gebeurt in functie van de grootte van de moleculen
Steeds visueel volgen
Controle of elektroforese gestart is = vorming van bellen
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur fraukevanmeulder. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €3,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
50843 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans