De hoofdstukken waarnemingsmethoden, epitheel en bindweefsel staan samengevat in dit document. Er zijn tabellen gemaakt om verbanden duidelijk te maken.
Waarnemingsmethoden
o histologie = leer van de weefsels
o weefsels bevatten intracellulaire vloeistof en intercellulaire matrix
o vaak membraneuze structuren rondom
o interactie via matrix (collagene vezelfs en grote hoeveelheden eiwitten)
o micrometer (μm) en nanometer (nm)
o micron (μ = 1μm) en angström (Å = 0,1 nm)
Weefselvoorbereiding
Fixatie
o stopt metabolisme
o legt structuur vast
o bereidt voor op daaropvolgende behandelingen
o vorming van artefacten (= verandering van preparaat in vorm of volume)
voorkomen
o crosslinken, denatureren en onwerkzaam maken van enzymen, structurele
proteïnen en fosfolipiden
o met vers weefsel
o veel water in cellen en weefsels fixeren door bevriezing
o LM
groot aantal fixatieven (bevat vooral formaldehyde en picrinezuur)
Bouin
formaline: verzadigde oplossing van formaldehydegas in water (= formal)
o EM
bevat vaak glutaaraldehyde
vaak dubbelfixatie (= glutaaraldehyde en osmiumtetroxide (crosslinkt
onverzadigde banden in vetzuren))
o immersie = stukje weefsel in fixatief ondergedompelt
o perfusie = fixatief via bloedvaten van het orgaan
Inbedding
o vloeibaar inbedmiddel dat na afkoeling verhard (om goed te kunnen snijden)
o meestal eerst dehydratie, dan lipidenoplosmiddel, dan inbedmiddel
o LM
vloeibare paraffine
stalen mes in microtoom (snijmachine voor coupes)
5 μm dik
coupes gestrekt op warm water, op objectglaasje, gedeparaffineerd,
gekleurd, dekglaasje
o EM
harde inbedding met epoxyharsen
plastiek verhard in 2 dagen
glazen of diamanten mes in ultramicrotoom
50-100 nm dik
opgevangen op wateroppervlak, opgevist door grid (= metalen roostertje),
gecontrasteerd
,Kleuring
o componenten absorberen kleurstoffen anders
o zure componenten basische kleurstof (hematoxyline, methyleenblauw)
o basische componenten (= acidofiel, eosinofiel) zure kleurstof (eosine)
o HE-kleuring (hematoxyline-eosine-kleuring): donkere kernen, roos cytoplasma
Lichtmicrosopen
o doorvallend wit licht
o drielenssysteem
condensor: bundelt doorvallende
licht
objectief: tussenbeeld
Kölherse verlichting: juiste afstelling
condensor en objectief
oculair: vergroot en projecteerd
o digitale camera en computer kunnen
aangesloten worden
o eindvergroting: vergoting objectief X
oculair
Oplossend vermogen
o = de resolutie
o de kleinste afstand tussen 2 puntendie
nog net gescheiden kunnen worden
waargenomen
o vooral afhankelijk van objectief
o vergroting en resolutie in evenwicht
goede beeldinformatie
o numerieke apertuur (NA)
o resolutie = λ/NA
o achromaat, apochromaat: met kleurcorrectie
o planapochromaat: ook voor planiteit gcorrigeerd)
Fasecontrastmicroscopie
o ongekleurde preparaten
o bewerken van kleine faseveranderingen die ontstaan door brekingsverschillen in
het preparaat
Interferentiemicroscopie
o fasevertragingen die optreden wanneer licht passeert door transparante
objecten met verschillende brekingsindexen
o pseudoreliëf
o andere details te zien
Polarisatiemicroscopie
o periodieke of repetitieve rangschikking van atomen, moleculen of
supramoleculaire eenheden gepolariseerd licht draaien geen uitdoving van
licht tussen 2 gekruiste polarisatiefilters
o 1ste polarisatiefilter = polarisator: onder condensor
o 2de polarisatiefilter = analysator: tussen objectief en oculair
Fluorescentiemicroscopie
o excitatielicht (korte λ) emissielicht (langere λ)
o excitatiefilter: beperkt excitatielicht tot bepaalde λ
, o sperfilter: verwijdert resten excitaitelicht uit bnudel
o emissielicht uitgezonden door preparaat door sperfilter
o fluoriserende delen lichten op tegen donkere achtergrond
o fluorescerende probes lokalisatie antigenen of nucleotidevolgorden
o photo bleaching = aanstraling van fluorescerende stof verlies deel
fluorescentie
Confocale ‘laser-scanning’-microsoop
o scherpe monochrome laserbundel door spiegelsysteem via objectief naar
preparaat gestraald volgens scanning (blad lezen)
o pinhole: laat enkel licht door afkomstig van het focusvlak van de objectieflens
o fotomultiplierbuis: meet hoeveelheid licht door pinhole pixel
o 3D reconstructie mogelijk
Superresolutiemicroscopie
o optical nanoscopy
o lasermicroscopie
o waarneming van objecten in fluorescerend gekleurde preparaten ver onder het
oplossend vermogen van andere lichtmicrosopen
o resolutie tot 20 nm
Correlarieve micriscopie
o 2 verschillende opnamen met gelijke eindvergroting van 2 verschillende
microscopen
o beelden combineren
Elektronenmicroscopen
Transmissie-elektronenmicroscoop
o TEM
o resolutie: 0,1 nm
o 5-7 elektromagnetische lenzen
o vacuüm
o potentiaalverschil tussen kathode en anode elektronen naar anode versneld
o gat in anode elektronen niet buiten koers in holle kolom
o condensor, objectief, projectorlens
o preparaat via vacuümsluis ingebracht
o verstrooiing van elektronen uit bundel door contrastmiddelen
o fluorescentiescherm of fotografische film
‘Scanning’-elektronenmicroscoop
o SEM
o preparaatoppervlak door scannende elektronenbundel afgetast
o secundaire elektronen aangetrokken door detector (positief geladen)
o grijswaarden
o oppervlakken
o maanlandschapeffect
o kleiner gebied van preparaat vergoting verhoogt
o resolutie: < 6 nm
o na fixatie en dehydratie: kritisch-punt-drogen (kritisch-punt-droogtoestel)
o bevroren en daarna gebroken breukvlak
, ‘Scanning-probe’-microscopen
o SPM
o levende cellen
o AFM
atomic-force-microscoop
fijne naald op flexibele bladveer
tast preparaat af
gestuurd door piëzo-elektrische kristallen
naald nadert preparaat buiging hol (afstoting) of bol (aantrekking)
buiging evenredig met grootte en richting van de kracht (reflectie van een
laserstraal)
grijswaarde
De interpretatie van microscopische beelden
o vergelijken
o willekeurige sneden van ruimtelijke structuur verschillende 2D beelden
o 3D beelden door opeenvolgende coupes
Vriestechnieken
o geen fixatie, dehydratie en inbedding tijd gewonnen
o cryostaat: vriescoupes maken
o vriesschade: ijskristallen
zeer snel invriezen, cryoprotecans toevoegen, onder hoge druk invriezen
amorf ijs minder schade
o breukvlak: gedetailleerde beeldinformatie
o bevroren breukvlak vacuüm ijs sublimeert reliëf versterkt (vriesetsen)
Celkweek
o elk celtype kan gekweekt worden
o kweekmedium met voedingsstoffen en groeifactoren
o kunnen prolifereren
o functies van 1 celtype in vitro bestudeerd
o in vivo: in levend dier, in vitro: in glas, in situ: op plaats waar ze normaal
voorkomen
o aseptische techniek
o cellen losmaken uit weefselverband: enzymen adhesiemoleculen en
celcontacten verbreken
o monolayer: enkele laag cellen
o confluentie = contact met elkaar na vermeerderen groei stopt
Histochemie en cytochemie
o speciefieke reactie tussen natuurlijke verbinding in cel en toegevoegde stof
Nucleïnezuren
o Feulgen-reactie: paarsrood complex
o methylgroen-pyroninekleuring: DNA blauwgroen, RNA rood
Eiwitten
o kleuren van bepaalde AZ
o immunocytochemische methoden
o falloïdine: F-actine
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur BiomedischeStudent. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €2,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
