Resume
VOLLEDIGE Samenvatting Methoden In Het Biomedisch Onderzoek 1
- Établissement
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Alle hoofdstukken van het volledige jaarvak samengevat, alles staat erin Ik had met deze samenvatting 18/20
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
Methoden allesHoofddoelen verschillende technieken
Celculturen
Functie: studiemateriaal
Bv.: Primaire-, geïmmoraliseerde-, kanker-, stamcelcultuur
Methode (staalbereiding):
1) fysiologische vloeistof afnemen 2)cellen van interesse selecteren 3)in cultuur brengen
4) invriezen (cryopreservatie) of verder mee werken (in incubator)
Weefselculturen
Functie: studiemateriaal
Methode (staalbereiding): 1) staalname 2)bewaren via fixatie (op kamerT) of invriezen
Modelorganismen
Functie: studiemateriaal
Bv.: Gist, worm, vlieg, zebravis, kikker, muis
Centrifugatie
Functie: scheiden deeltjes
Bv.: isolatie van plasma, PBMC, serum, organellen of celfractioneringen
Methode scheiding:
- Sedimentatie dmv Fz
→op grootte, densiteit, vorm
- Klassieke: afdraaien => pellet
- Differentiële: afdraaien met ≠G-force => isolatie organellen (≠zuiver)
- Densiteitsgradient: Zonale: staal op gemaakte gradient en afdraaien
→ op grootte en massa
Isopycnische: mengen gradient en staal + afdraaien
→ op densiteit
Methode afdraaien: via rotor (vaste hoek, swinging bucket, verticale)
→ lage vs hoge vs ultrasnelheid (analytische en preparatieve)
FACS en MACS
Functie: celsortering van levende cellen
Bv.: single-cell (FACS)
Methode: FACS: fluoresc. antistof tegen cellen van interesse: laser => lading => scheiding (electrode)
MACS: magnetische antistof: magnetisch veld in kolom => gemerkte uit suspensie
LCM
Functie: celsortering bij weefsels => levende cellen selecteren
Methode: IR-laser => film klevering => plakt aan weefsel
UV-laser => deel weefsel in tube catapulteren
,Immunodetectie
Functie: visualiseren/ selecteren cel van interesse
Methode:
! vals positieve (selectiviteit) vs vals negatieven (sensitiviteit)
Lichtmicroscopie
Functie: lichtbron door structuur sturen
=> vergroten met voldoende resolutie en contrast (contrast door het licht)
Methode:
- Kohlerbelichting: condensor lens positioneren zodat velddiafragma (beeldvlak) scherp
=> parallelle lichtbundel door preparaat => homogene belichting
- Contrasttechnieken:
▪ Klaarvleld: kleuring => contrast
▪ Donkerveld: strooilicht opvangen => contrast
▪ Fasecontrast: interferentie verstrooide en directe licht => contrast
▪ DIC en polarisatiecontrast: interferentie 2 ⊥ gepolaris. lichtbundels => contrast
Bioluminescentie
Functie: lichtemissie => meten mechanismes gekoppeld met genexpressie (en post-TXN-regulatie)
=> meten celviabiliteit (cytotoxiciteit), kinaseactiviteit, contaminatie
=> in vivo: snelle detectie tumor (meet via CCD)
Methode: luciferine, luciferase, O2, ATP → oxyluciferine + lichtemissie
Fluorescentie
Functie: via fluorescente kleurstof: detectie target mole (kan via immunofluorescentie)
via fluorescent proteïne: meten en lokalisatie genexpressie of activiteit promotor
in vivo
Methode: lichtabsorptie door fluorofoor => lichtemissie
1. FLIM
Levensduur aangeslagen toestand fluorofoor bepalen => OZ omgevingsfactoren
- Fluoroforen scheiden → meet hoe snel fluorescent signaal verzwakt
2. FRAP en FLIP
Meten diffusiesnelheid en mobiliteit in cel
- Bleaching regio => meet hoe snel signaal herstelt vs volledig verloren gaat
3. FRET
OZ moleculaire interacties inter- of intracellulair
- Overlap emissiespectrum donor - excitatie acceptor => E transfer => shift spectrum (E daalt)
Fluorescente microscopie
Functie: vergroten + contrast doordat structuur zelf licht uitzend
Methode: lichtbron => exciteren fluorescente moleculen => terugval grondtoestand => beeldvorming
Epi- vs confocale- vs 2-foton fluorescentiemicroscopie (van dun → dikke preparaten)
, UV/Vis spectroscopie
Functie: Kwalitatieve en kwantitatieve (concentratie) analyse eiwitten, DNA, …
Zuiverheid DNA
Methode: bindingselectronen absorberen fotonen => I licht daalt => I meten met PMT => A = ∆I
Spectrofluorimetrie
Functie: FACS, sanger sequencing, concentratie DNA bepalen, meten FRAP, FRET, FLIP, FLIM
Methode: licht: exciteert fluorofoor → terug naar grondtoestand: emissie licht → I meten met PMT
IR-spectroscopie
Functie: Kwalitatieve analyse (fingerprint): geeft vibraties (obv absorptie) van een mole weer
=> geeft polaire karakter binding weer
Methode: mole absorbeert fotonen => vibratie: geeft warmte E af aan omgeving => I licht daalt
=> meten verandering E (vibratieniveau) met IR detector
Raman scattering
Functie: geeft vibraties (obv verstrooiing) van een mole weer
=> geeft covalente karakter binding
Methode: laser (hoge I): E van licht => mole naar virtueel aangeslagen toestand: vervorming e- wolk
=> E verandert => meet verandering E (vibratieniveau) in verstrooide licht
NMR
Functie: structuuranalyse,
Methode: molecule in magnetisch veld: RF puls met juiste Lamorfrequentie van de H-kernen
=> verandering magnetisatie => meten relaxatie
Massaspectroscopie
Functie: scheiden + analyse deeltjes op m/z ratio
via harde ionisatie: kwalitatieve analyse (fragmentatie in functionele groepen)
via zachte ionisatie: kwantitatieve analyse + geeft MW van mole
Methode: ionenbron: laden moles → massa analyser: scheiden → detector: meten intensiteit
via continue dynode e- multiplier (hoornshape) of microchannelplate
Kolomchromatografie
Functie: scheiden stoffen + opvangen
Methode: op molecuulgrootte, affiniteit, adsorptie of lading
HPLC normaal (trager, minder R, grotere V) vs UPLC (korter, meer R)
→ evaporative light scattering of UV/Vis detector
GC met gepakte kolom (grote V, weinig R, lang) of capillaire (klein V, korter, gevoeliger)
→ TCD of FID
Combi massaspectroscopie en kolomchromatografie
- HPLC gecombineerd met ESI
- GC gecombineerd met CI of EI
Scheiding componenten mengsel via chromatografie
Massa analyse van de componenten met MS (bepalen structuur afzonderlijke componenten)
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur paulinebal. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €12,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
81989 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans