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cours magistral de biologie moléculaire
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ludivinehugot
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CM3 biomolSchéma général d’un vecteur de clonage plasmidique (bactérie procaryote) = nom du 1 er schéma de CM
MCS= cassette de polyclonage. Comprenant l’insert c’est-à-dire la molécule d’ADN à cloner.
Schéma générale d’un vecteur de clonage plasmidique navette
Navette car il peut être multiplier dans un contexte bactérie et dans un levure
Origine de repli levure : pour que les levures copie le plasmide
CEN = région de portion centromérique (partie d’un centromère). Elle fonctionne en association avec l’origine de
réplication « levure » pour être sur que le partage des molécules de plasmides se fasse de manière équitable entre les 2
C de levures sœurs issues de la mitose.
Gène de synthèse de la leucine = gène de sélection qui permet aux C d’être auxotrophe pour la leucine et donc de
survivre dans un milieu sans leucine.
les vecteurs bactérien de type viral :
Les bactériophages lambda
Région centrale de environ 25Kb
, Schéma de clonage bactérien
Insert fait entre 5 et 10Kb
Phase lytique : circularisation du génome du bactériophage lambda + réplication + synthèse protéique+ assemblage des
particules lambda.
Phase lysogénique : circularisation du génome du bactériophage
Une fois la phase lytique enclencher on a la mort de la bactérie.
Le génome bactérien et le génome viral peuvent évoluer rapidement, Il y aura toujours des génomes viraux qui vont
réussir a s’adapter aux mutation des bactérie pour donner la phase lytique.
Quand la région centrale ne suffisait plus a tuer les bactéries, alors on la modifiait pour pouvoir les tuer. On a donc soit
de l’ADN natif soir de l’ADN intéressant pour les chercheurs pour multiplier notre ADN d’intérêt.
Donc on a soit l’ADN natifs dans le virus natif soit l’ADN choisi (=insert)
L’insert n’est pas très grand car au-delà de 10Kb les C n’arrivent pas a les répliquer correctement.
Le vecteur bactériophage lambda peut aller jusqu’à 25Kb.
Certains vecteurs de clonages sont des chromosomes artificiels comme les BAC les YAC et les PAC, et les insert peuvent
aller de 5 à 2000 b.
Recombinaison des vecteurs de clonage = intégration d’un insert dans un vecteur :
La stratégie la plus classique est le coupé/collé ( coupé = enzymes de restriction et collé c’est les ligases pour la réaction
ligation)
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