Resume
Samenvatting Werkzitting 1 immunologie
- Cours
- Immunologie
- Établissement
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Werkzitting 1 immunologie
[Montrer plus]
1 vérifier
Par: xthundercloudx • 7 mois de cela
Aperçu du contenu
Immunologie werkzittingIn labo: wat heb je nodig en hoe kan je eraan geraken
Vraagstelling:
Hoe kunnen humane monocyten/macrofagen na infectie bij een patiënt de antimicrobiële respons
versterken door neutrofiele granulocyten aan te trekken om de infectie te bestrijden?
Antwoord: In vitro methode voor dit na te gaan:
Met of zonder gebruik van m-o
Materiaal nodig voor experiment op te starten
1) Macrofagen en monocyten zuiveren:
uit humaan bloed (zitten in bloedbaan)
(bloedstaal bevat RBC, bloedplaatjes, plasma en WBC (monocyten))
=> zuivere monocyten
2) Je wil zien wat er bij antimicrobiële respons gebeurt: stof toevoegen voor stimuleren
Optie 1: MET gebruik m-o: toevoegen levende bacterie of virus aan monocyten
Optie 2: ZONDER gebruik m-O
G- bact: LPS toevoegen vs G+ bact: peptidoglycaan, flagelline vs virussen: dsRNA
=> liganden voor de tol-like-R
3) Je wil neutrofielen aantrekken => dit kan door chemokinen
=> dit moeten de monocyten produceren
Extra: bij muis:
kan macrofagen via peritoneum afnemen => hier zitten veel macrofagen
+: je kan in vivo werken: echte infectie van de muis: in het organisme doen)
Hoe bekom je de cellen en wat ga je er mee doen?
1. Zuiveren monocyten
Optie 1 : Isolatie PBMCs uit bloed:
=> werk met WBC, NK cellen, lymfo- en monocyten
1) Medium nemen bv. ficoll
2) Pipeteer hierop bloed
3) Centrifugeer 30min => °scheiding: onder RBC – granulocyten (zie je niet: zijn minder dan RBC)
– medium – witte band met PBMCs (WBC: lymfo- en monocyten, NK cellen) – plasma
1
, Optie 2 : zuiveren specifiek monocyten
=> dmv flowcytometrie cel per cel sorteren (langs laser) => traag)
dmv magnetische beads (snel)
positieve selectie: Ab’s tegen monocyten op magnetische beads bv. CD14
nadeel: kan dat beads een effect hebben op je mole
negatieve selectie: 1e zuiveren PBMC’s, dan gebruik Ab’s tegen lymfocyten en NK cellen
=> enkel monocyten lopen door (+: geen effect v/d beads)
Inductie experiment:
Kweek de cellen (monocyten) met bepaalde celconcentratie in 24 well plaat in groeimedium
=> incuberen cellen: 37°C (humane cellen), foetaal kalfsserum (met GF),
zoutoplossing (geen osmotische shok); buffer: CO2 incubator (stabiele pH) (24-48u)
=> toevoegen verschillende stoffen => stimuleren monocyten:
TLR liganden (G+, G-, virus)/cytokinen => microbiële respons
=> Cytokine 8 (IL8) (meest gemaakt door monocyten en meest actief) vrijgezet door monocyten
=> meet hoeveelheid geïnduceerd chemokine in bovenstaande vloeistof (na centrifugatie) met
immunologische test
2. Immunologische test gebruiken voor concentratie IL-8/ CXCL8
bepalen
Concentratie IL8 bepalen
welke test?:
ELISA (meest effectief), RIA, (in cyto kijken of IL-8 productie)
western blot (moeilijk voor juiste conc. bepalen, +: je ziet ook MW van eiwit)
maak schema met verschillende stappen (zie slide 11-14)
maak lijst met nodige materiaal en reagentia
hoe bekom je de reagentia?
Reagentia nodig voor de immunologische test: Ab’s nodig
Ab’s maken:
- Polyklonale Ab maken:
w gesecreteerd door meerdere klones Ag-specifieke B cellen
Immuniseer konijn meerdere x’en met Ag
met adjuvans (alum, CFA, poly I:C => sterkere respons)
=> proefdier bloed afnemen => Ab’s uit serum zuiveren: bloed laten stollen (cellen in stolsel)
=> °zuiver serum => affiniteitschromatografie:
ofwel covalent Ag (IL8) op kolom zetten (maar is duur, wel zeer specifiek)
ofwel matrix met proteïne A of G op kopen (alle Ab’s zullen binden => crossreactie,…)
voordeel: kan meerdere keren bloed nemen van 1 muis, Ab’s tegen ≠ epitopen,
polyklonaal Ab => agglutinatie en neerslag (immunoprecipitatie)
nadeel: ≠ bloedingen => Ab’s met ≠ affiniteit, crossactiviteit tgn ander Ag
2
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur paulinebal. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €3,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
81989 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans