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Samenvatting methoden in biomedisch onderzoek hoofdstuk 9: spectroscopie

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Ik was geslaagd voor alle vakken via mijn samenvattingen ;)

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  • 10 août 2022
  • 14
  • 2022/2023
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julievandenabbeele
Spectroscopie
Methoden hoofdstuk 9


Spectroscopische technieken

Interactie van licht met een staal

Absorptie = vermindering van de intensiteit van de invallende straling door het specimen
Emissie = excitatie door invallende straling veroorzaakt door emissie van straling


Elektromagnetische (EM) straling

- Beperkt deel is zichtbaar licht = 350-780 nm
- Volledig spectrum kan gebruikt worden voor spectroscopie
- EM straling met verschillende energieën  verschillende eigenschappen van stof




Interactie van elektromagnetische straling met materie

Bij absorptie gaat stof van lage energie toestand naar hogere energie toestand
 enkel fotonen met energie die overeenkomt met
energieverschil tussen 2 energieniveaus worden geabsorbeerd


Spectrum
= intensiteit/absorptie als functie van energie (intensiteit ↓ als absorptie ↑)

Bij atomen  absorptielijnen
Bij organische stoffen  absorptiebanden

, UV/Vis spectroscopie / spectrofotometrie

Wat kan je meten met UV of zichtbaar licht?

Niet-geconjugeerd systeem vb. bij ethyleen
→ UV licht (veel energie) nodig voor elektron van grond- naar aangeslagen toestand

Geconjugeerde sysytemen
→ Complexer systeem minder energie nodig om elektronen van orbitaal te wisselen


Vb. Bij retinol: complementaire kleur wordt geabsorbeerd (paars)
en geel wordt uitgezonden
Vb. Bij Lycopene (complexer): groene kleur geabsorbeerd en rood
wordt uitgezonden




Spectrofotometrie maakt gebruikt van zichtbaar licht om concentratiebepaling te doen


Bepaling van het spectrum dmv spectrofotometer

Lichtbron:
- Deuterium lamp  UV spectrum
- Wolfraam / halogeen lamp  zichtbaar licht en IR spectrum
- Xenon lamp  UV tot IR spectrum


Selectie golflengte:
- Absorptiefilter
- Prisma = monochromator op basis
van dispersie (breking)
- Reflectierooster = monochromator op basis van interferentie en feit dat licht een
verschillende afstand aflegt bij reflectie door een andere groef


prisma kortere golflengtes beter groter glas absorbeert licht met l ≤
gescheiden 350 nm

reflectierooster uniforme scheiding compact meer strooistraling (filters)


Sleufopening die bepaalt de golflengtes van de monochromator die worden toegelaten

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