Observatie: bacteriën kunnen getransformeerd (= veranderd) worden doordat ze DNA uit de
omgeving kunnen opnemen
➔ geldt NIET voor elk DNA;
o DNA van bepaalde bacteriestammen werd dadelijk na opname afgebroken
o DNA van andere bacteriestammen bleef intact
➔ Er was een restrictie op het ‘soort’ DNA dat tot transformatie kon leiden
= aanwezigheid van endonucleasen die ‘vreemd’ DNA herkennen en afbreken
Endonucleasen = restrictie-enzymen: hydrolyseren de fosfodiesterbinding in de ruggegraat v/d
DNA keten en doen dit midden in een DNA fragment (i.t.t. de exonucleasen)
Restrictie-enzymen herkennen korte palindromische sequenties (4, 6-8 bp.) en knippen in of in de
omgeving van deze sequenties
➔ Meeste restrictie-enzymen knippen symmetrisch in de 2 DNA strengen v/d DNA dubbele
helix
➔ Na restrictie ontstaan ofwel blunt end uiteinden, ofwel 5’ overhangende uiteinden ofwel 3’
overhangende uiteinden
,Herkenningssequenties = restrictie-sites
→ restrictie-enzymen worden genoemd naar het organisme waaruit ze zijn afgezonderd
vb. EcoRI werd afgezonderd uit de E. coli stam R en kreeg het nummer I
Groot aantal restrictie-enzymen
→ het eigen DNA van de bacterie wordt beschermd tegen de restrictie-enzymen doordat de
bacteriën naast de restrictie-enzymen ook steeds een 2de enzyme bevatten dat specifieke basen in
de herkenningssites methyleert → deze sequentie kan niet meer herkend worden door de eigen
restrictie-enzymen
Met restrictie-enzymen lange DNA moleculen op reproduceerbare wijze fragmenteren
→ complexiteit v/h DNA wordt drastisch verminderd
RESULTAAT = dat 1 bepaald gen (en ook het hele genoom) steeds op dezelfde manier zal geknipt
worden → electroforese uitvoeren van dit geknipte genomische DNA → deze fragmenten zullen
gescheiden worden volgens lengte; het specifieke gen (of alle DNA fragmenten die het bevatten)
zal na de electroforese op een welbepaalde positie in de gel terechtgekomen zijn
, 10.2 TERUGVINDEN VAN EEN SPECIFIEK DNA FRAGMENT
Identificatie en isolatie v/h DNA fragment dat ons interesseert (bv. gen, enhancer, promotor, ORI)
→ gebruik maken v/d eigenschap dat DNA kan gedenatureerd worden en dat complementaire
DNA fragmenten kunnen hybridiseren
- Denatureren = het uit mekaar halen v/d 2 (complementaire) DNA strengen v/d dubbele
helix door de waterstofbruggen te breken
- Hybridiseren = het vormen van een dubbele DNA helix uit 2 enkelstrengige
complementaire nucleïnezuren (of RNA)
→ DNA fragment radioactief of fluorescent merken
→ na hybridisatie kan men het complementaire fragment in de gel lokaliseren
o Gemerkte fragment = probe
10.3 KLONEN VAN DNA FRAGMENTEN
10.3.1 PLASMIDEN
Plasmiden = minichromosomen die bij sommige bacteriën worden teruggevonden als
extrachromosomale, kleine, circulaire, dubbelstrengige DNAs
Plasmide moet een ORI bevatten om replicatie toe te laten (gaat anders verloren bij snelle
delingen v/d bacteriën) + een selectieve merker ( = gen dat codeert voor een bepaald voordeel
voor de gastheer; indien geen voordeel aan het dragen van plasmide zal dit snel verdwijnen)
Plasmiden gebruiken bij kloneren: reeks restrictie-sites naast elkaar inbrengen
→ leidt tot een ‘multiple cloning site’ of ‘polylinker’ → hierdoor kan men restrictiefragmenten van
verschillende kloneringsprojecten makkelijk in hetzelfde plasmide kloneren
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur merelBMW. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €4,59. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
