Dit document bevat de volledige samenvatting van de hoofdstuk 1 van het vak Histologie. Het bevat alles wat is gezien in de les en is dus 100% representatief van de lessen. Bevat alles wat je moet kennen voor het examen!
Histologie Methoden (microscopische technieken) 1e Ba BMW
0. Leerdoelen
× Lichtmicroscopische technieken kennen
× Elektronenmicroscopische technieken kennen (geavanceerde microscopie in Ba3)
× Beelden van coupes en microscopische technieken koppelen
× Verschillen tussen LM en EM preparatietechnieken verklaren
× Bewust worden van grootteverschillen in cellen en weefsels en het bereik van de
gehanteerde microscopische technieken
1. Inleiding
Grootte van enkele basiscellen:
× RBC: 6 µ𝑚
× Eicel – Follikel: < 100 µ𝑚
× Skeletspiercel (-vezel): Enkele mm tot tientallen cm’s
× Diameter mitochondrion: 0,2 µ𝑚
Microscoop moet 3 (F) vervullen:
1) Vergroting: Vergroot beeld van het specimen produceren
2) Resolutie: Details in het beeld scheiden
3) Contrast: Details zichtbaar maken voor het menselijk oog, een camera of een ander
waarnemingsapparaat/beeldopname-apparaat
Oog LM TEM
Vergroting 1000x 450.000 x
Resolutie 0,1 - 0,2 m𝑚 0,2 µ𝑚 0,1 n𝑚
Verschillende types van microscopen worden gebruikt in tal van situaties:
× Stellen van klinische diagnoses
× Structuren visualiseren voor onderwijs- of onderzoeksdoeleinden
× …
2. Resolutie en numerieke apertuur
Resolutie (scheidend- of oplossend vermogen): Vermogen v/e microscoop om 2 punten op coupe als
afzonderlijk te kunnen waarnemen. (voor beste microscopen bij optimale instelling 0,2µm)
× 𝑛 = brekingsindex vh medium tss objectief & preparaat (max: 1)
× µ = halve tophoek van de apertuurkegel.
Droge objectieven (medium = lucht): NA steeds kleiner zijn dan 1.
Olie-immersielenzen: maximale NA ongeveer 1.4
Water-immersie lenzen: maximale NA 1.2.
1
, Histologie Methoden (microscopische technieken) 1e Ba BMW
Formule voor de resolutie v/e microscoop is: 𝑅 = 𝜆 /𝑁𝐴
× 𝜆 = golflengte van de belichting
× 𝑁𝐴 = numerieke apertuur van de objectieflens. (=kwaliteitswaardemeter voor het objectief)
Uit vergelijking kan een # zaken aflgeleid worden:
× Hoe hoger de NA, hoe beter de resolutie zal zijn want R zal kleiner worden.
× Hoe korter de golflengte (𝜆), hoe beter de resolutie wordt.
Þ Hoge (goede) 𝑅 bekomen als 𝑁𝐴 zo hoog mogelijk & 𝜆 vd belichting zo kort mogelijk houdt.
Belichtingssysteem moet altijd zo ingesteld staan dat een maximale helderheid bekomen wordt.
Lagere belichtingsintensiteit heeft lagere resolutie tot gevolg.
Toch spelen er andere factoren mee die remmend werken op onbeperkte vergrotingen. Indien dit
niet was: mogelijk om vergrotingen te bekomen die 1000x groter zijn dan specimen zelf
Breking van het licht is golflengte afhangkelijk!
Lensfouten
× Chromatische abberatie: elke kleur eigen brandpuntsafstand – appochromatische lenzen
× Sferische abberatie: brandpuntsafspand hangt af van afstand van invallende straal tov
optische as – PLAN-gecorrigeerde lenzen
× Astigmatisme: stralen in een vlak door de optische as hebben een andere brandpuntsafstand
dan stralen in een vlak dat niet door het midden van de lens gaat.
3. Voorbereiding van een preparaat voor conventionele lichtmicroscopie
× Uitstrijkje van cellen in suspensie (bloed) – Weefselsneden (coupes)
Werkwijze: FIXATIE – INBEDDING – SNIJDEN EN OPVANGEN - KLEUREN
1) Het te onderzoeken orgaan of weefsel uit dier verwijderen
2) Fixeren door: perfusie (via bloedbaan), immersie (onderdompelen: in bv formaldehyde) of
door chemische verbindingen “cross linking” (tuusen fixatief en de in het weefsel aanwezige
biomoleculen)
× Noodzakelijk om degradatie van weeefsel door bacteriën en enzymen tegen te gaan
× Door fixatie blijft (ultra)structuur van het weefsel bewaard
3) Gefixeerde weefsel spoelen, daarna dehydrateren (in baden met oplopende [ ] van ethanol),
daarna ingebed in paraffine (probleem: paraffine is waterafstotend)
4) Weefselblokje (omgeven dr paraffine) in houder microtoom geplaatst (snijdt dunne coupes)
5) Coupe (2 tot 7 µ𝑚 dik) opgevangen op draagglaasje en gedeparaffineerd d.m.v. xyleen
Overlangse, dwarse, en schuine doorsneden
6) Via omgekeerde alcoholreeks weefsel opnieuw in waterig milieu brengen om voor kleuring
× Kleuring = noodzakelijk. Ongekleurd weefsel ong zelfde brekingsindex als glas ® in gewone
LM met doorvallend licht weinig zichtbaar. Kleur zorgt vr differentiatie van versch structuren
× HE-kleuring: Hematoxyline: basische kleurstof (zure affiniteit). Eosine: kleurt basische delen
2
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur StudentBi0med. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €2,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
