,BLT HC1 Waarnemingsmethoden
De leeruitkomsten die horen bij ‘waarnemingsmethoden’ (HC01) zijn:
- De student moet de betekenis van de dik gedrukte termen in het boek
kunnen omschrijven en kunnen uitleggen in de context van het vakgebied.
Dit geeft direct een indruk van het niveau van de leerdoelen en het
detailniveau van de theorietoets.
- Let op! De samenvatting wel.
Niet bestuderen: fasecontrastmicroscoop, interferentie microscoop,
polarisatiemicroscopie, confocale laserscanmicroscoop (CLSM),
superresolutiemicroscopie en Elektronenmicroscopen.
Niet bestuderen: Enzymhistochemie en cytochemie en Immunohistochemie
(p19 tot einde).
Weefselvoorbereiding
Coupes zijn dunne plakjes weefsel die gebruikt worden bij microscopie. De coupes
bevatten te weinig contrast om ze te bestuderen en worden daarom gekleurd. Om
een coupe te maken wordt weefsel bewerkt. Hierdoor kan het gebeuren dat er
artefacten ontstaan. Dit zijn onbedoelde bijverschijnselen op een preparaat
(kunstmatige en reproduceerbare veranderingen).
Fixatie
Fixatie zorgt ervoor dat het metabolisme van cellen en weefsel stopt en de
structuur vast wordt gelegd. Ook is de voorbereiding van de behandelingen die
volgen. Fixatie kan met behulp van chemicaliën, maar ook door middel van
bevriezing. Het voorkomt autolyse waarbij cel afbreekt door vrijkomen enzymen uit
lysosomen.
Voor lichtmicroscopie worden fixeermiddelen gebruikt, zoals Bouin (histoloog).
Dit is een fixeermiddel/fixatief dat vooral formaldehyde (G) en picrinezuur bevat.
Formaline bestaat uit een verzadigde oplossing van formaldehydegas in water
(formol). Het formaldehyde reageert met reactieve groepen uit het weefsel. Deze
zijn te vinden op de macromoleculen. De belangrijkste reactieve groepen voor
formaldehyde aminogroepen (-NH2) die veel voorkomen op eiwitten en
nucleïnezuren.
Fixatieven voor elektronenmicroscopie bevatten meestal glutaaraldehyde (L), een
buffer en een stof om het fixatief isotoon te maken, ter voorkoming van
volumeverandering van cellen. De 2 aldehydegroepen in glutaaraldehyde
vormen crosslinks met NH2-groepen in eiwitten.
Dubbelfixatie wordt vaak gedaan bij elektronenmicroscopie. Na glutaaraldehyde
wordt er osmiumtetroxide (S, anorganische verbinding) toegepast. Deze stof
fixeert en crosslinkt onverzadige banden in vetzuren. Hierdoor kan een groot deel
van de moleculen goed bewaard worden.
, Inbedding
Om weefsel te kunnen snijden moet het geïmpregneerd worden met een vloeibaar
inbedmiddel dat verhard wordt na afkoeling of polymerisatie. Voor het inbedden
wordt een stukje weefsel gedehydrateerd met een alcoholreeks (doorvoeren).
Hierna wordt het weefsel in paraffine (inbedmiddel) gedompeld, dit dringt door in
het weefsel en verhard na afkoeling. Het weefsel kan vervolgens gesneden worden
met een stalen mes in een microtoom. Een microtoom is een apparaat waarin
coupes gesneden worden.
Voor elektronenmicroscopie wordt een harder inbedmiddel gebruikt met
epoxyharsen (polymeer). Zodat er dunnere coupes gesneden kunnen worden.
Deze coupes worden gesneden met een ultramicrotoom met een glazen of
diamanten mes. De coupes worden opgevangen op kleine metalen roosters
(grid), dit zijn preparaatdragers.
Kleuring
Kleurstoffen geven de componenten van een cel kleur, het ene component
adsorbeert de stof sterker dan het andere component
waardoor er kleurverschillen ontstaan. Nucleïnezuren (-) zoals
DNA en RNA kleuren donkerblauw/paars met de basische
kleurstoffen hematoxyline/methyleenblauw. Eosine in een
zure kleurstof die vooral basische componenten (cytoplasma
+) roze kleurt (NH2-groepen van eiwitten). Deze componenten
heten acidofiel of eosinefiel.
- Positief geladen onderdelen binden aan negatief geladen
kleurstoffen (acidofiele/eosinefiel kleurstoffen)
- Negatief geladen onderdelen binden aan positief geladen
kleurstoffen (basofiele kleurstoffen)
Lichtmicroscopen
Preparaten in een lichtmicroscoop worden meestal bekeken met doorvallend
witlicht, ook wel helderveld-lichtmicroscoop genoemd. De optiek (kijk op iets)
bestaat uit 3 lenssystemen:
- Oculair bovenste lens waar doorheen gekeken wordt
- Objectief bepaalt de lichtsterkte, oplossend vermogen en kwaliteit van
het beeld samen met de belichting
- Condensor zorgt dat er voldoende licht op preparaat valt
De afstelling van het objectief en de condensor gaat volgens de Köhler
verlichting. De eindvergroting is vergroting objectief x die van het oculair.
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur silke10. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €6,83. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.