In deze samenvatting staat alle theorie te kennen voor het examen. Ik was geslaagd voor dit vak, maar je moet de leerstof wel echt goed kennen. Hoofdstuk 4 is een heel belangrijk (en groot) deel.
ISO = International Standardisation for Organisation
Erkend als referentie methoden voor officiële controles
Gebaseerd op de klassieke cultuurmethode: selectieve media voor groeien, isoleren
en tellen
van doelwitorganisme
Ontwikkeld op basis van expertise
Open acces methoden: samenstelling van medium vrij beschikbaar, technieken
beschreven
1. KLASSIEKE CULTUURMETHODE (KWEEKMETHODE)
1) Vooraanrijking
- Op niet-selectief of half-selectief medium
- Herstel van gestresseerde m.o. teweegbrengen (groei alle bacteriën)
2) Aanrijking
- Op selectief medium
- Competitieve flora geïnhibeerd: groei van doelwitorganisme
- Zouten toevoegen
3) Isolatie
- Op selectief differentiërend medium
4) Bevestigende testen
Algemeen: De detectie van klassieke cultuurmethode berust op het vermogen van een
m.o. om zich onder geschikte omstandigheden te vermenigvuldigen tot aantallen die
waarneming mogelijk maken.
Selectief = medium met optimale groeiomstandigheden voor een bepaalde bacterie
Differentiërend = indicatoren toevoegen om verwant te zien (vb pH)
1-4 dagen of 5-7 dagen
Modificaties mogelijk om sneller te gaan (differentiële media gebruiken)
Eenvoudige kits/minisystemen voor bevestiging (API)
,API strip:
- Gedroogd substraat in kleine cupjes
- Resultaat via applicatie ingeven en resultaat berekenen
- Identificatie/bevestiging op species niveau
- Voordeel: geen verschillende VB aanmaken, onmiddellijk 20 testen
- Strip incuberen na enten
1.2. ALTERNATIEVE METHODEN
• Voordeel klassiek: geen dure infrastructuur
• Nadeel klassiek: arbeidsintensief, grote volumes media en tijdrovend
• Snelle methode: kortere tijd tot detectie + automatisatie
• Alternatieve methode: analyse van meerdere stalen tegelijk (= automatisatie)
• 4 soorten:
- Chromogene VB
- Immunologische methode
- Moleculaire methode
- Massa spectrometrie (MS)
1. CHROMOGENE VOEDINGSBODEM
• Determineren bacteriën: aantonen van enzymatische activiteit nodig
• Op agarplaat: specifiek bacterieel enzym aangetoond door omzetting van
toegevoegde substraat
• Kolonies/bodem veranderen van kleur
• Bij conventionele VB: pH-gevoelige indicator
• Bij chromogene VB: chromogene substraten
- Chromogeen deel afgesplitst door enzym in doelwitorganisme
- Kleurverandering/Fluorescentie
- Verdere biochemische testen geëlimineerd
- Determineren verloopt sneller en goedkoper
- Bevestigende test aanbevolen
• Salmonella, E.coli, coliformen, L.monocytogenes …
2. IMMUNOLOGISCHE METHODEN
Antigenen = deeltjes van bacteriën waartegen antistoffen gevormd kunnen
worden
, H-antigenen: eiwitten van flagellen
O-antigenen: deeltjes van celwand
K-antigenen: deeltjes van slijmlaag
• Gebaseerd op specifieke binding tussen antilichamen en antigenen
• Vervangt stap 3 (isolatie)
• Stap 3: gebruik gemaakt van specificiteit antigen-antilichaam (sneller)
• Verschillende immunoassays: ELISA en Agglutinatie test
Enzyme Linked Immunosorbent Assays (ELISAs)
Immunoassay gecombineerd met enzym assay
Sandwich ELISA:
1. Specifieke AL gecoat op een cupje
2. Staal toevoegen + binden op AL
3. AL specifiek tegen AG toevoegen
4. Substraat toevoegen: omgezet door enzym op AL signaal
Signaal: maat voor hoeveelheid antigen aanwezig is
In de vorm van geautomatiseerde systemen
- Minder arbeidsintensief
- Verbeteren de reproduceerbaarheid en standaardisatie van elke stap
VIDAS: Salmonella, Listeria spp., L.monocytogenes, E.coli, Campylobacter
spp., Staphylococcus enterotoxines A tot E
Agglutinatie test
Gebaseerd op interactie antilichamen en antigenen
Vervangt stap 4 (bevestigende test)
S.aureus: m.o. heeft rol van antigen
Antigen aanwezig: AL reageert met AG door agglutinatie
- Door cross-linking tussen AG en AL
, Soms gevolgd door serologische test
- Antigenische kenmerken bepalen
- O- of H-antigenen aanwezig: agglutinatie in contact met AL
- Serotype bepalen van Salmonella en E.coli
Voorbeeld: Staphytect
3. MOLECULAIRE METHODEN
• Gebaseerd op genetisch materiaal van m.o. (DNA of RNA)
• Maken gebruik van mogelijkheid om 2 enkelstrengige DNA-moleculen in vitro te
hybridiseren
Hybridiseren = koppelen van 2 complementaire strengen DNA tot dubbelstrengig DNA
Polymerase Chain Reaction (PCR)
DNA kopiëren in testbuisje
Mogelijk om grote hoeveelheid van klein stukje DNA (=target) te maken
Enzym: DNA polymerase (kopieert DNA streng)
Primers: specificeert de regio/target dat gekopieerd moet worden
Primer = korte oligonucleotide waarvan sequentie complementair is met einde van
targetregio
3 stappen:
1. DNA gedenatureerd: verhitting van 95°C splitst 2 strengen
2. Temperatuur ↓ tot 65°C + primers toevoegen: 1 op begin en 1 op einde andere
streng
3. Temperatuur ↑ tot 72°C + enzym polymerase toevoegen met aantal nucleotiden:
complementaire streng geproduceerd, opnieuw dubbelstrengig DNA
Meerdere cyclussen: exponentiële verhogen kopieën
Resultaat: gevisualiseerd door agarose gel elektroferese en kleuring
Real-time PCR: variant (ook kwantificatie)
30-90 minuten
Stap 1 en 2 nog nodig
Toegankelijkheid verhoogd: standaardisatie, gebruiksvriendelijk en software
Positief resultaat: klassieke cultuurmethode ter bevestiging
Voor detectie van Salmonella, L.monocytogenes en E.coli O157
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur febedauwe. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €6,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
