Resume
Samenvatting Les 5/6 van Biotechnologie
- Cours
- Biotechnologie (K09J3A)
- Établissement
- Katholieke Universiteit Leuven (KU Leuven)
Samenvatting van les 5 van biotechnologie van de slides, met eigen notities.
[Montrer plus]
Aperçu du contenu
Biotechnologie Les 5: designing, purifying and understand antibodiesOpwarming: Ab, fragmenten en equivalente moleculen
Ab en hun derivaten
- 150 kDa: 4 polypeptiden van 2 genen met 2 zware en 2 lichte ketens
assembleren in gastheer tot een IgG van volledige lengte.
- Sterkte antigenbinding = functie van variabele domeinen in terminale
fragment.
IgG expressie
- Individuele peptiden kunnen tot expressie gebracht worden in E. Coli.
o Niet geglycosyleerd
o Verminderde omgeving van cytoplasma stopt assemblage
Ze kunnen op zichzelf vouwen maar Cys-bruggen nodig tussen EW om te
assembleren tot de correcte structuur: cytoplasma E. Coli daar niet
bevorderlijk voor
o Zonder assemblage zijn EW niet stabiel makkelijk aggregeren
- Bij voorkeur: eukaryote gastheer = gist of hybridoma’s / welke Ab chassis.
o Ab (full length) van volledige lengte, chaperones nodig om te vouwen en
glycosylering voor functie: eukaryote gastheer kan beiden bieden.
o Chassis = Ab-ruggengraat (muis, chimeeer, gehumaniseerd en menselijk): centraal
onderdeel in fabricageproces beschrijven waaraan u nog onderdelen toevoegt.
Menselijk = minst immunogeen
Gehumaniseerd: minste aanpassingen of optimalisatie voor therapeutica.
Muis mAb: therapeutisch of diagnostisch
Immunogeniciteit van muis Ab verminderen:
o Fv overbrengen naar gehumaniseerde chassis chimeer Ab
o Alleen CDR-lussen, die direct contact maken met antigen,
overbrengen naar gehumaniseerde chassis.
IgG fragmenten
- Levensvatbaar biotherapeuticum zolang de antigen binding behouden blijft
- Geen volledige IgG nodig voor functie: zolang Fv behouden blijft en binding mogelijk is, kan
dit molecule gebruikt worden voor functie.
o Humaan Ab of gehumaniseerde chassis: 2 fragmenten/ketens voor een volledig Fv,
dus dAbs niet optimaal
Andere natuurlijke Ab-structuren
- Haaien-Ab en kameelachtigen-Ab: binden met hoge affiniteit vanuit een enkel domein (scFv).
o Top of IgG equivalent: geen dubbele keten voor binding maar singel domein capabel
voor het bereiken van de hoge affiniteit, hetzelfde een humaan Ab zou bereiken.
- Fragmenten daarvan kunnen ook gebruikt worden:
o Nanobodies = kameelachtig singel dAbs (kleiner dan scFv): VHH-domein.
,Biotechnologie Les 5: designing, purifying and understand antibodies
EW ontworpen voor binding
- Patroon voor succesvolle EW = lage immunogeniciteit.
- Patroon in hun ontwikkeling = gerichte evolutie
- Toepassingen gaan verder dan biotherapeutica
o Diagnostische reagentia = ELISA
o Biotechnologische toepassingen = EW-zuivering, verbeterde PCR
o Onderzoeksmiddelen = Ab-fluorescerende EW-fusies
o Bioremediatie = metaalbindende peptiden
, Biotechnologie Les 5: designing, purifying and understand antibodies
EW productie in andere gastheren
Relevante gastheren voor op grote schaal EW-expressie
Sterktes Limitaties
Prokaryoten - Makkelijk manipuleren (incl: - Minimale post-
- E. coli ontwikkelen) translatie modificatie
- Grote schaal fermentatie (PTM)
- Eenvoudige en goedkope grondstof - Laagste ondersteuning
- Hoge opbrengt (yield) voor EW-vorming
Gisten - Makkelijk manipuleren - PTM kan anders zijn
- Pichia pastoris - Grote schaal fermentatie bij de mens
- Hoge opbrengst
Mammalia cel - Alle PTM beschikbaar - Trage groei
- CHO = chinese - Kan groeien in suspensie - Moeilijk opschalen
hamster ovary - Duur
- Afhankelijk van serum
Vereisten voor EW-expressie in nieuwe gastheer
- Methode om gastheer te transformeren.
o Waar DNA in gastheer inbrengen is niet gegeven
Bacterie: geslachtsgebonden elektroporatie in staat om DNA in cel af te
geven inefficiënt voor complexere cellen owv celwanden = algen,
plantencellen.
- Geschikte vector: stabiel
o Plasmide (E. Coli): maar zijn niet allemaal stabiel
o Shuttle vector = plasmide dat groeit: bezit alles om te groeien in een andere gastheer
- Selectiemarkering
o Kan gebruikt worden in de gastheer die je transformeert
o Bij shuttle vector: werkt op origineel organisme en
bestemmingsorganisme.
- Bekende onderdelen (promotor, RBS, terminator)
pRS
= diverse en meest populaire familie van shuttle-plasmiden voor E. Coli en gist.
- Gist: shuttle vector = deel van sequentie voor replicatie van bacteriën en
ander deel van sequentie voor replicatie van gisten.
- Strategie om vectoren te creëeren waar je efficiënt in E. Coli kan werken en dan verplaatsen
naar productie streng (=gist).
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur VDSA. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €7,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
84251 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans