Instrumentele: deel III:
chromatografische technieken
en principes
Hoofdstuk 1: algemeen theoretische
achtergrond
Chromatografie = techniek gebaseerd op scheiding 2/meer opgeloste substanties aanwezig in een
staal
mengsel (staal) in zijn samenstellende bestanddelen fractioneren (scheiden)
1 substantie uit mengsel isoleren
oplossing aanconcentreren
kwalitatieve + kwantitatieve analyse
Gebaseerd op verdeling opgeloste substanties tussen 2 fasen:
stilstaande stationaire fase
lopende mobiele fase
Vertraging op de stationaire fase indien er interactie is: vertraging moet ≠ zijn voor componenten
zodat ze met ≠ snelheid door kolom
Stationaire fase geïmmobiliseerd in kolom: staal op top van kolom
aanbrengen, mobiele fase continu toevoegen
Staalcomponenten verdelen zich tussen 2 fasen en worden door
mobiele fase doorheen kolom gevoerd
Door selectieve vertraging op stationaire fase bewegen ze met ≠ snelheid (elueren) en worden gescheiden
1
,1.1. Types kolomchromatografie
Indeling in functie van ….
Type mobiele (gas/vl) en GLC, GSC, LSC, LLC
stationaire fase (vl/v)
Interactiemechanisme aan * Adsorptiechromatografie
basis van selectieve * Partitie- = verdelings-
vertraging (vnl deze wij) * Ionenuitwisselings- (ion exchange IEC)
* Gel- (size exclusion SEC)
* Affiniteits-
zie interactiemechanismen verder gezien: dit als soort
samenvattende figuren!!!
Manier van uitvoering Elutie, verdringings-, frontale-
2. Het scheidingsproces
Chromatografische kolom = statisch systeem in evenwicht
Substantie A is in evenwicht tussen mobiele M en stationaire fase S : A M ↔ AS
2
, Voorbeeld: 20% A in M, 80% A in S
A in de mobiele fase beweegt voort in incrementen maar blijft
hierbij in evenwicht met A in de stationaire fase
Het 20-80 evenwicht wordt namelijk hersteld doordat A in de
mobiele fase komt: doordat de mobiele fase voortbeweegt komt A
weer uit de stationaire fase om het evenwicht te herstellen
2.1. Beschrijving scheidingsproces
Evenwicht beschrijven door evenwichtsconstante K = molaire conc component in stationaire fase M s
gedeeld door molaire conc in mobiele fase MM = verdelings-/partitiecoëfficiënt
K = M S / MM
= (nS / VS) / (nM / VM) = (nS / nM) / (VM / VS)
K is componentspecifiek voor een bep chromatografisch systeem
Grote K = grotere conc in stationaire fase = veel interactie met stationaire fase = langere
verblijftijd in stationaire fase dus langer in kolom: tR
Kleine K = veel interactie met mobiele fase = sneller uit kolom
2.2. Visualisatie scheidingsproces
Detector meet een fysische eigenschap van de eluerende substanties
bijkomende voorwaarde = mobiele fase bezit deze fysische eigenschap niet/amper zodat er
geen/weinig signaal van de mobiele fase is, anders komt het detectiesignaal van de eluerende
substantie en de mobiele fase
Gemeten eigenschap elektrisch signaal chromatogram: signaal ifv tijd of volume
, Piekkarakteristieken: moeten symmetrisch zijn + niet overlappen
VORM:
* Gaussiaans = symmetrisch
* Tailing = scheef naar rechts = right skew
= fractie component komt er meer vertraagd uit dan rest
* Leading = left skew = typisch bij te veel op kolom brengen:
dan is er onvoldoende interactie met stationaire fase: komt er versneld uit
KWANTIFICATIE: hoogte, oppervlakte
Tailing wordt beschreven adhv de asymmetriefactor: As = BC/CA
3. Retentie
Retentieparameters kan je afleiden uit chromatogram:
Klein signaal na aantal min = injectiesignaal want solvent waarin
componenten worden opgelost vertoont enkel interactie met
mobiele fase: loopt eruit
tM / VM = t0 / V0 Nul (hold up) tijd / volume
Tijd om doorheen kolom te migreren zonder enige interactie met de stationaire fase
tR / VR Brutoretentietijd / volume
Tijd tussen injectie en maximum detectorrespons
t’R / V’R Nettoretentietijd / volume
= t R - t M / V R - VM
4
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur Farmaceut123. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €5,19. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
