Resume
Samenvatting Hoofstuk 1: Histologische technieken
- Établissement
- Universiteit Gent (UGent)
Samenvatting weefsels hoofstuk 1 bevat zowel de ppt als wat er gezegd is tijdens werkcollege
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Histologische technieken Doel: weefsels en organen observeerbaar maken voor lichtmicroscoop (LM) en elektronen
microscoop (EM)
Probleem:
weinig contrast in biologisch materiaal, grijsachtige kleuren
weinig licht (elektronen) doorlatend, te dik
Methodes:
1) Fixatie
2) Inbedden
3) Snijden
4) Kleuren of contrasteren
1. Fixeren
doden van weefsel op een manier dat de structuur behouden blijft
Bewaren van weefsels met behoud van oorspronkelijke structuur = denatureren van eiwitten =>
stilleggen van bacteriële en autolytische afbraakreacties
3D structuur eiwitverbreken = werking stil
Permeabiliseren van celmembraan
weefsel bestaat uit cellen, gaatjes maken daarin zodat fixatief er in kan (ook kleurstoffen kunnen
binnendringen)
Harder en poreuzer maken van het weefsel
van zacht weefsel kunnen geen dunne sneetjes gemaakt worden
door poreuzer kunnen kleuren binnendringen
Hoe:
Chemische fixatie: immersie (onderdompelen in fixatief) of perfusie (fixatief inspuiten) van het
weefsel met een fixatief
Vb. ethanol, azijnzuur, glutaaraldehyde, osmiumtetraoxide, formaldehyde
precitiperend fixatief: eiwitten neerslaan (alcoholen)
groslinkend fixatief: eiwitten aan elkaar vastzitten (werking stil) (formaldehyde)
Koude fixatie: invriezen van weefsel
vorm minder goed dan chemische fixatie
! Artefacten: veranderingen die tijdens fixatie in weefsel ontstaan en afkijken van de in vivo situatie
2. Inbedden
Het gefixeerde materiaal omwikkelen en doorbrengen met een inbedmiddel
Inbedmiddel:
Substantie die in het weefsel indringt
Substantie die hard wordt
Materiaal snijdbaar in dunne plakken (coupes)
Paraffine (LM), hars en plastic (EM)
komen eerst voor in vloeibare toestand, kunnen rond materiaal en binnen gaan, worden hard
Inbedmiddelen: hydrofoob – bevat veel water (paraffine mengt niet met water, weghalen)
Eerst weefsel ontwateren: weefsel in stijgende (concentratie) reeks alcoholbaden brengen:
30°, 50°, 70°, 90° en absolute alcohol
‘clearing’ in tolueen (oplosmiddel): mengbaar met alcohol en het inbedmiddel
, 3. Snijden
Door de hardheid van inbedmateriaal: snijdbaar in dunne plakken
Paraffine: 5µm (1-20µm) doorlaatbaar voor licht, LM
Microtoom met stalen mes
Hars, plastics:
50nm – 2µm: halfdunne coupes, LM
Microtoom met glazen mes (meer details dan paraffine)
70nm (60-100nm) doorlaatbaar voor elektronen, EM
Microtoom met glas- of diamantmes
4. Kleuren – lichtmicroscopie
4.1. Helderveld-LM = bright field LM
Wit licht: spectrum golflengtes (380-720nm) kleurverschillen ontstaan door verschillen in
lichtabsorptie
Contrast in coupes laag => visualisatie van cel bestanddelen en extracellulair materiaal in het
weefsel door te kleuren
Kleurstoffen: waterige oplossingen (vaak)
Zure, basische en indifferente kleurstoffen
Coupes worden eerst gedeparaffineerd (tolueen)
want water zal afgestoot worden anders door paraffine
eosine vaak gebruikt, rood om duidelijk te zien waar aangebracht
4.2. Zure en basische kleurstoffen
Routine histologische kleuring: Haematoxyline (base, blauw) – Eosine (zuur, roos) (HE)
Gebaseerd op differentiële aanwezigheid van zure (-) en basische (+) weefselbestanden
(na denaturatie)
Vb. kern: veel zure groepen, cytoplasma: veel basische groepen
Zure groep: H+ ionen afgeven
Vb. COOH in eiwitten
HPO4 in DNA en RNA
H2SO4 in cytoglycanen
Basische groep: H+ ionen opnemen
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur merelgeerts2. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €3,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
53340 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans