Gedoceerd door B. Vervaet en A. Verhulst.
Dit document bevat de volledige samenvatting van het vak "Identificatie, karakterisatie en kwantificatie van biomoleculen" (Analytische biochemie 2).
De samenvatting betreft de hoofdstukken: (1) Analytische performantie, kwaliteitscontrole en kalibra...
ANALYTISCHE
BIOCHEMIE 2
IDENTIFICATIE, KARAKTERISATIE EN KWANTIFICATIE
VAN BIOMOLECULEN
2e Bachelor Biomedische wetenschappen
2e Bachelor Biochemie en Biotechnologie
Universiteit Antwerpen
, RT
Analytische performantie, kwaliteitscontrole en kalibratie
ANALYTISCHE PERFORMANTIE
AARD VAN DE ANALYSE
Kwalita'eve analyse:
- Gebruikt voor iden:fica:e, detec:e of aantonen vd bestanddelen in preparaat, monster of staal
- Met de kwalita:eve analyse wil men weten welke substan:e er in een staal zit zonder de concentra:e te weten
Kwan'ta'eve analyse:
- Beoogt het inwinnen van informa:e omtrent de rela:eve hoeveelheid (gehalte, concentra:e) van één, meerdere
(par:ële analyse) of alle bestanddelen (totaalanalyse) aanwezig in een staal
- Als men 1 component van het staal wil bepalen gebeurt dit via Individuele analyse
o Bv. concentra:e glucose in serum
- Als men meerdere verwante componenten in het staal wil bepalen doet men dit a.d.h.v. groepsanalyse
o Bv. concentra:e van het totale eiwitgehalte in het serum
De kwan:ta:eve analyse berust op de me:ng van een fysische of fysico-chemische grootheid die rechtstreeks of onrechtstreeks
evenredig is met de hoeveelheid te doseren bestanddeel:
- Een reac:e is specifiek wanneer ze enkel doorgaat met het bestanddeel dat men wil onderzoeken.
- Voorbeeld: % van een groep zonder betreffende ziekte die m.b.v. test terecht als niet ziek worden geclassificeerd.
- In ideale omstandigheden is de test 100% specifiek
o D.w.z. dat het signaal 100% aZoms:g van het te onderzoeken bestanddeel.
- Hoe hoger de specificiteit van een test, hoe lager de sensiviteit.
- We kunnen de specificiteit van een test verbeteren door een aantal parameters aan te passen.
o pH, complexvorming, temperatuur, oxida:egraad, voorafgaande elimina:e interfererende factoren
Selec'viteit
- Een reac:e is selec'ef wanneer ze voorkeur vertoont voor het te onderzoeken bestanddeel, maar desondanks ook
posi:ef kan reageren op andere bestanddelen.
o Bv. transferine in serum bepalen: je beschikt over een test die de concentra:e aan transferine kan bepalen
maar die ook een signaal kan veroorzaken voor een aanverwant eiwit zoals ferri:ne.
- De test is dus selec:ef voor het bepalen van eiwi_en op zich maar niet voor 1 specifiek eiwit.
- In de prak:jk wil je dit niet en heb je dus een test nodig met een heel hoge specifiteit
1
, RT
GEVOELIGHEID (SENSITIVITEIT)
Gevoeligheid van een test wordt bepaald door de helling van de ijkcurve.
- Hoe hoger de helling, hoe hoger de sensi:viteit
De gevoeligheid drukt men ook wel uit als signaal per eenheidsconcentra:e
Voorbeeld: HIV test
- Bij een HIV test wil men de sensiviteit zo hoog mogelijk zodat we kunnen
vermijden dat er fout-nega:eve uitslagen zijn.
- Dit betekent dat men wil vermijden dat een ziek persoon toch als gezond getest wordt
Karakteris'eke concentra'e
- Voor bepaalde technieken gebruikt als maat voor gevoeligheid (bv. bij atomaire absorp:espectrometrie – zie later)
- Dit is de hoeveelheid van een te bepalen stof (in µg) die een absorban:e van 0,0044 (1% absorp:e) teweegbrengt
- Gepubliceerde gevoeligheidswaarden zijn een uitstekende referen:e voor het afstellen/kalibreren van de apparatuur of
het controleren of de anayles betrouwbaar is.
BLANCOBEPALING
Bepaling van de frac:e van het totaalsignaal dat niet te wijten is aan het te bepalen bestanddeel in het te analyseren staal
- Er dient steeds een blancobepaling uitgevoerd te worden, zodat je de blancobepaling kan adrekken van het resultaat.
Voorbeeld: bloedstaal verdunnen in een bepaald solvent (mogelijkheid dat het solvent niet 100% zuiver is)
- Aluminium (Al) in serum.
o Als je het staal verdunt in het solvent, zal je naast Al in het staal ook een kleine frac:e Al in het solvent meten.
o De gemeten frac:e aluminium in het solvent is de ruis.
o Om dit te voorkomen is het belangrijk dat vooraf de ruis van het solvent bepaald
o Als er ruis aanwezig is, kan je dit adrekken van het signaal dat je krijgt van je staal in het solvent
o Hierdoor verkrijgt men de effec:eve concentra:e van aluminium in het staal krijgt.
DETECTIE- EN KWANTIFICATIELIMIET
Detec'elimiet (limit of detec'on – LOD)
- Minimale concentra:e van de te bepalen stof die een signaal veroorzaakt dat tweemaal zo groot is als het
achtergrondsignaal (peak to peak noise)
- M.a.w. de conc. die een signaal/ruis verhouding (S/N = signal-to-noise) van 2 teweegbrengt
- Soms wordt ook de formule 3 x SD* blank signaal gebruikt
- Is van groter analy:sch belang dan de gevoeligheid gezien naast de signaalgroo_e ook het achtergrondsignaal in
rekening wordt gebracht.
- Met de detec:elimiet kan men geen concentra:e bepalen, wel aantonen dat het te bepalen bestanddeel aanwezig is
Kwan'fica'elimiet (limit of quan'fica'on – LOQ)
- Laagste concentra:e die kwan:ta:ef kan worden bepaald
- Ze wordt veelal gedefinieerd als 10 x de standaarddevia:e van het blanco singaal
- Met de kwan:fica:elimiet kan je een concentra:e bij het desbetreffende signaal van het te bepalen bestanddeel
berekenen
2
, RT
Detec'elimiet ≠ gevoeligheid !!!
Sensi:viteit
- De gevoeligheid van een methode wordt bepaald door de helling
van de ijkcurve. Hoe hoger de helling, hoe hoger de sensi:viteit
- Bij de sensi:viteit kijkt men enkel naar de signaalgrooGe
Detec:elimiet
- De detec:elimiet is de minimale concentra:e van de te bepalen
stof die een signaal veroorzaak dat 2x zo groot is als het
achtergrondsignaal
- Bij de detec:elimiet wordt het achtergrondsignaal mee in
rekening gebracht
Figuur
- De sensi:viteit van methode A en B zijn gelijk aan elkaar omdat de helling van de ijkcurve gelijk is
- De detec:elimiet bij methode B is kleiner en dus beter dan die van methode A
o Bij methode A heb je een groter achtergrondsignaal
o Hoe kleiner het achtergrondsignaal, de pieken, hoe beter de detec:elimiet
ACCURAATHEID EN PRECISIE
Accuraatheid:
- maat voor de afwijking vd gemeten waarden t.o.v. onbekende werkelijk waarde
- In de meeste gevallen stelt men bepaalde eisen aan de accuraatheid (bv. max afwijking: 5%)
- Het probleem van een goede accuraatheid is dat het gemiddelde verschuid
Precisie (reproduceerbaarheid):
- maat voor de reproduceerbaarheid van analyseresultaten
- het probleem van een goede precisie is dat de standaardafwijking s:jgt
- als maat voor de precisie gebruikt men ook de term varia:ecoëfficiënt
o De varia:ecoëficiënt wordt bepaald als de standaarddevia:e (SD) van de verschillende me:ngen van hetzelfde
staal/gemiddelde waarde (µ) van de verschillende me:ngen van het staal
𝑆𝐷
𝑉𝐶 =
𝜇
Hoe hoger de VC, hoe minder precies à strikt genomen reflecteert de varia:ecoëfficiënt dus de imprecisie
Intra-varia:ecoëfficiënt (within run precision / repeatablility):
- Gemiddelde afwijking tegenover het gemiddelde binnen dezelfde run en dus onder dezelfde condi:e
- Bv. je hebt 1 staal en meet dit 20x na elkaar
Inter-varia:ecoëfficiënt (between run precision / reproducibility):
- Gemiddelde afwijking tegenover het gemiddelde bij verschillende runs en dus onder verschillende condi:es
- Bv. vandaag 20 me:ngen doen, morgen 20. Er worden andere verdunningen gebruikt…
De standaarddevia:e ligt hoger bij de inter-varia:ecoëfficiënt.
- De standaarddevia:e is heel hoog bij de inter-varia:ecoëfficiënt waardoor het een slechte reproduceerbare methode is
Een goede precisie wil niet zeggen dat we automa:sch een goede accuraatheid hebben!
Zowel de precisie als de accuraatheid van een analy:sche methode moet bepaald worden bij verschillende concentra:es
3
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur StudentBi0med. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €8,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
