Examen
Gentechnologie I: Uitgewerkte examenvragen
- Cours
- Gentechnologie I
- Établissement
- Universiteit Gent (UGent)
Voorgaande & veelvoorkomende vragen, volledig uitgewerkt aan de hand van cursus & slides
[Montrer plus]
Vendeur
S'abonner
Aperçu du contenu
Gentechnologie I2e bachelor Biochemie-Biotechnologie
Uitgewerkte vragen (theorie + wc)
, De Veylder
Open vragen
Bespreek zinkvinger endonuclease
Deze nucleasen zijn hybride moleculen opgebouwd uit een polymeer zink vinger domein
specifiek voor een welbepaalde DNA herkenningssequentie, gekoppeld aan een FokI
endonuclease domein.
FokI restrictie-enzym functioneert als een dimeer eiwit
→ 2 heterodimere zink vinger nucleasen worden aangemaakt voor de volledige verknipping
van dsDNA
→ herkenning door aanwezigheid van zink vinger structuren (zie figuur)
→ DNA herkenning van beide hybride nucleasen
→ FokI domein van beide hybride resulteert in dimerisatie van FokI
→ verknipping van het DNA
Bespreek gradiëntszuivering
,Gelelektroforese + uitleggen welke techniek je bij een fragment van 50 tot 200 kb zou
gebruiken
Bij 50-200kb → Pulsed Field Gelelektroforese
→ Fragmenten boven 50 kb kunnen niet door poriën dus lopen langs de gel (als reptiel)
Bij elke verandering in stroomshock moeten de fragmenten zich wenden
- Grote fragmenten → moeilijker wendbaar
(2x) Bespreek 2 mogelijkheden om willekeurige mutaties aan te brengen en om
plaatsspecifieke mutaties aan te brengen.
Willekeurige mutagenese kan via
- Mutatorstam
- Straling
- Chemische mutagenese
De 2 mogelijkheden voor plaatsspecifieke mutaties zijn de volgende:
1. Als er een unieke knipplaats is in het gekloneerd DNA ter hoogte van de plaats waar een
mutatie bestudeerd moet worden, kan hier geknipt worden.
→ Bij toevoeging exonuclease → deletie
→ Er kan ook een synthetisch oligo worden toegevoegd in plaats van een exonuclease →
frameshift
Het probleem hier is dat er een unieke restrictieplaats moet aanwezig zijn
2. Toevoegen oligonucleotide-primer → plaatsspecifieke mutagenese → primer zal met
het DNA annealen, dat enkelstrengig werd gemaakt na denaturatie door hittebehandeling.
, → Dit kan ook zonder perfecte complementariteit in de juiste condities
Na de aanhechting van de mutagenese-primer & 1e replicatie-ronde → parentale
plasmidestreng draagt methylatie.
Deze streng kan geknipt worden door methylatie-specifieke restrictie-enzymen (Dpn1),
terwijl de ongemethyleerde strengen ongedeerd blijven en zullen vermenigvuldigen, dan
→ inverse PCR: primers gaan van elkaar wegkijken ipv naar elkaar toe.
Waar de ene primer dan stopt gaat de andere starten zodat de hele vector kan worden
geamplificeerd.
Als er dan een mutatie in één van de 2 primers aanwezig is, wordt een specifieke mutatie
geïntroduceerd.
Ligatie van de vector: werkt alleen bij aanwezigheid van
→ ATP
→ 5’ fosfaat
De gemethyleerde parentale streng kan verwijderd worden door behandeling met Dpn1.
De willekeurige mutaties kunnen als volgt worden geïntroduceerd:
1. Gebruik van mutatorstam
= stam waarin willekeurige mutagenese kan worden bekomen bij het binnenbrengen van
een gen.
→ Zo een stam kan deficiënt zijn in stappen van de DNA repair machinerie (mutS, mutD,
mutT) → zorgt voor hogere mutatiefrequentie dan in WT stammen
De vector wordt in de mutatorstam gebracht.
Tijdens replicatie van de vector gaan er veel fouten worden ingebouwd. Het genetisch
materiaal wordt geïsoleerd en gesequeneerd.
→ eenvoudig & goedkoop om een groot aantal random puntmutaties in te brengen in een
gen van interesse
→ Nadeel: kolonies groeien traag, de aspecifieke mutaties kunnen ook plaatsvinden in een
gen dat we helemaal niet willen onderzoeken
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur NVbiochem. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €8,49. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
Peut-on faire confiance à Stuvia ?
4.6 étoiles sur Google & Trustpilot (+1000 avis)
84251 résumés ont été vendus ces 30 derniers jours
Fondée en 2010, la référence pour acheter des résumés depuis déjà 14 ans