IMMUNOLOGIE PARTIM PROF. DELPUTTE
FLOW CYTOMETRY
= cruciaal instrument binnen de immunologie, men kan hiermee cellen identificeren
WERKING
- Bevat een buisje met een hele fijne naald. Het buisje bevat vloeistof dat door de
naald wordt opgezogen, inclusief alle cellen
- De vloeistof wordt opgezogen & vervolgend door een hele dunne buis geduwd,
zodat er maar 1 cel tegelijkertijd door kan. Dit is het flow principe
- Vanwege hydrodynamica is er een goede flow & ontstaat er geen ophoping
- Elke cel passeert vervolgens een lichtstraal, waarna vervolgens wordt gemeten
welk licht erheen komt.
FORWARD SCATTER (FSC)
- Wordt gemeten: zal de lichtdensiteit meten: hoeveel licht gaat er doorheen de cel?
SIDE SCATTER (SSC)
- Meet de lichtverstrooiing: zegt iets over aantal granules (meer granules meer verstrooiing)
1
,MULTIPARAMETRISCHE DOTPLOT
Ieder puntje is een cel. Je weet zo hoeveel licht er doorheen is gegaan
- D= aangenomen debris, zeer kleine partikels met heel lage FSC & SCC
- L/M zijn waarschijnlijk leukocyten/ monocyten. Kleine tot middelgrote
cellen met weinig interne complexiteit of granulatie. Deze cellen
genereren een middelgrote FSC & een lage SCC-signaal intensiteit
- G zijn granulocyten. Dit zijn grote cellen met een grote interne
complexiteit of granulatie. Ze genereren daarom sterke FSC & SCC
signalen.
FLUORESCENTIE (FL)
Aangezien lymofcyten er op deze manier allemaal hetzelfde uitzien, is er een bijkomende methode nodig.
Door monoklonale antistoffen te maken die maar 1 CD herkennen kunen ook T-cellen van elkaar onderscheiden
worden
- Deze antistoffen worden fluorescent gelabeld (FL) & bij de vloeistof gedaan.
- Vervolgens wordt er ipv gewoon licht, UV-licht doorheen gestraald, in bepaalde frequenties
- De fluorochromen binden aan bepaalde cellen in een bepaalde mate. In het appraat zitten meters die
bepaalde spectra meten, op die manier valt voor iedere cel te zien hoeveel signaal er aanwezig is
- Als er veel antistoffen gebonden zijn, zijn er veel receptoren & geeft dat een sterk signaal. Zo valt te zien of
er bv veel CD4 of juist CD8 op de cellen zit.
DOT PLOT VS PICTOGRAM
DOT PLOT
- Op dot plot ziet men op x-as welk fluorochroom het beste op welke manier bindt.
o Rechts= hopge concenetratie. Hier zijn de meeste macro’s positief
- Dot plots worden v eel gebruikt voor FSC & SCC, maar ook om complexe populaties zichtbaar
te kunnen maken
HISTOGRAM
- Wordt meer gekeken naar bepaalde events: hoeveel cellen hebben een
bepaald karakter?
- Er wordt een controle-as gebruikt waarvan we weten dat die cellen niet
zouden mogen binden & de waardes daar dus niet binnen kunnen vallen
- Hiervoor wordt een cut-off gezet, vanaf die waarde kan men zien hoeveel
cellen er positief zijn, maar ook of er een verschil is voor vs na een
immunisatie.
IMMUNOLOGICAL STAINING: FSC – SCC – CD4 – CD8
2
, AANMAAK
- Om bepaalde cellen te merken
- Hiervoor wordt bloed afgenomen, waarvan de cellen in cultuur worden gezet.
- Hierbij zullen de cellen dissociëren, waardoor men afzondelrijke cellen in suspensie overhoudt
- Aan deze suspensie worden fluorescent gemerkte antistoffen toegevoegd, die al dan niet binden aan de cel
UITKOMST ADHV DOT PLOTS
- Op de dot plots worden telkens dezelfde populaties bekeken, met verschillende fluo merkers (CD4 & CD8
antistoffen)
- Bij het eerste plaatje is de populatie onderaan de lymfocyten, de populatie in het midden zijn de
monocyten & de uitgesmeerde vlek zijn de granulocyten
- hier wordt gekeken naar SCC & FSC, adh daarvan kan men nl zien dat er werkelijk verschillende populaites
zijn (L, M, G)
- men kan vervolgens een selectie maken, door een gate (R(egio)) in de SSC/ FSC te selecteren
o in dit geval de rode groep, de lymfocyten
o men ziet dan dat alle stipjes bij CD8 positief zijn. Ook CD4 is rood.
- De blauwe populaite zijn de monocyten, zoals we aan de SSC/ FSC zien bevatten een kleine hoeveelheid
CD4
3
Les avantages d'acheter des résumés chez Stuvia:
Qualité garantie par les avis des clients
Les clients de Stuvia ont évalués plus de 700 000 résumés. C'est comme ça que vous savez que vous achetez les meilleurs documents.
L’achat facile et rapide
Vous pouvez payer rapidement avec iDeal, carte de crédit ou Stuvia-crédit pour les résumés. Il n'y a pas d'adhésion nécessaire.
Focus sur l’essentiel
Vos camarades écrivent eux-mêmes les notes d’étude, c’est pourquoi les documents sont toujours fiables et à jour. Cela garantit que vous arrivez rapidement au coeur du matériel.
Foire aux questions
Qu'est-ce que j'obtiens en achetant ce document ?
Vous obtenez un PDF, disponible immédiatement après votre achat. Le document acheté est accessible à tout moment, n'importe où et indéfiniment via votre profil.
Garantie de remboursement : comment ça marche ?
Notre garantie de satisfaction garantit que vous trouverez toujours un document d'étude qui vous convient. Vous remplissez un formulaire et notre équipe du service client s'occupe du reste.
Auprès de qui est-ce que j'achète ce résumé ?
Stuvia est une place de marché. Alors, vous n'achetez donc pas ce document chez nous, mais auprès du vendeur DGKstudent317. Stuvia facilite les paiements au vendeur.
Est-ce que j'aurai un abonnement?
Non, vous n'achetez ce résumé que pour €6,99. Vous n'êtes lié à rien après votre achat.
